人硒蛋白P cDNA探针的制备及其在肝脏组织中的表达论文.docVIP

　　人硒蛋白P cDNA探针的制备及其在肝脏组织中的表达论文 南克俊 隋晨光 韩王月 刘彦仿 胡沛臻 秦海霞 景钊 刘陕西 【关键词】 人硒蛋白P Preparation of human selenoprotein P cDNA probe and expression in human hepatic tissue 【Abstract】 AIM: To investigate the expression of selenoprotein P mRNA in hepatic diseases, including cirrhosis and hepatocellular carcinoma (HCC). METHODS: Selenoprotein P cDNA fragment plified by PCR the expression of Selenoprotein P mRNA al liver, 20 cases of cirrhosis and 30 cases of hepatocellular carcinoma (HCC) by in situ hybridization. RESULTS: The PCR products evaluated by electrophoresis RNA a of liver, especially in the endothelial cells of vasculature. The positive expression rate of selenoprotein P mRNA al liver, cirrhosis and HCC. The rate of expression in hepatic carcinoma in normal liver and cirrhosis liver. The expression in nucleus of normal liver , but nucleolus shoost no staining. CONCLUSION: The expression of human selenoprotein P gene is significant different in the three kinds of liver tissues, suggesting that selenoprotein P may play a role in the occurrence and development of HCC. 【Keyan selenoprotein P; cDNA probes; PCR; in situ hybridization; carcinoma, hepatocellular 【摘要】 目的： 探讨SeP基因与肝脏疾病特别是肝癌发生发展的关系. 方法： 采用美国Georgia大学惠赠的质粒PBluescriptHuman Selenoprotein P，用PCR法制备人SeP cDNA探针，检测了13例正常肝脏、20例肝硬化、30例肝癌组织中SeP mRNA的表达水平. 结果: PCR产物经电泳鉴定与预期相符. 3种肝脏组织的组织间质均有SeP mRNA表达，主要位于脉管区的血管内皮；正常肝细胞、肝硬化肝细胞及肝癌细胞中SeP mRNA阳性率分别为84.6%，50.0%，20.0%. 肝癌细胞阳性表达率明显低于其他两组（χ2=15.84,.freelRNA的原位检测. 肝癌细胞中存在SeP mRNA的表达缺失，SeP基因的缺失可能与肝癌的发生有关. 【关键词】 人硒蛋白P；cDNA探针；PCR；原位杂交；癌，肝细胞 0引言 硒是人体必需的微量元素之一，参与GSHPx的合成，具有抗氧化损伤作用［1］，流行病学调查表明缺硒可导致恶性肿瘤的发生［2］. 实验证实食物中添加硒可以减少前列腺癌、结肠癌、肺癌及肝癌的发生［3］. 硒的许多生物学功能是通过硒蛋白来实现的，迄今已经发现了18种具有生物功能的硒蛋白，硒蛋白P（Selenoprotein P，SeP）是其中一种［4］. 人体几乎所有的组织中都含有SeP，近年来大量研究证实其与多种恶性肿瘤有关，已经成为研究的热点. 但从基因水平对肝癌组织中的SeP进行原位检测，目前尚少见报道. 因此我们制备了特异性的SeP cDNA探针，对正常肝脏、肝硬化、肝癌组织进行核酸原位杂交，检测其表达水平，探讨SeP与肝脏疾病特别是肝癌发生发展的关系. 1材料和方法 1.1材料质粒PBluescriptHuman Selenoprotein P由美国Georgia大学惠赠，全长为6.4 kb，为氨苄青霉素抗性（Amp+），宿主菌为JM109. 小量质粒提取试剂盒