【2017年整理】林木与遗传育种学实验.ppt

林木遗传学实验;实验一 植物有丝分裂制片及观察;二、实验原理 各种生长旺盛的组织中，如胞原组织、根尖、芽尖等分生组织常常进行细胞分裂。经过适当的取材处理，加以固定、离解、染色、压片方法，可以迅速将细胞分散到载玻片中，进而进行有丝分裂和染色体动态的观察。这是遗传学上通过细胞分裂观察染色体行为、形态结构、数目，从而进行组织分析，鉴别杂种等常用的制片方法。 ;三、实验器材 1 材料 大蒜根尖 2 器具 显微镜、小剪子、刀片、载玻片、盖玻片、培养皿、水浴锅、吸水纸、绘图纸 3 药品 卡诺氏固定液、0.1%秋水仙素溶液、0.1mol/L盐酸、醋酸洋红染液;四、实验方法 1 发根 大蒜为材料，将大蒜磷茎置于盛水的烧杯口上，使大蒜鳞茎与水相接，在25℃下发根。待根长1cm左右，于中午12:30～13:30切取根尖为宜。 2 预处理 将剪下的根尖立即放入0.1％秋水仙碱，以药液浸没根尖为度，处理3～4h。 ;3 固定 材料经预处理后，用流水冲洗，然后投入卡诺液Ⅰ（3份甲醇∶1份冰乙酸，现配现用）中固定20～24h，用95％的乙醇洗两次，转入70％乙醇中保存备用。 4 解离 常用酸解法：从70％乙醇中取出固定好的根尖→流水冲洗３min→吸水纸吸干→放入小试管中→加适量1 mol/L HCl于60±0.5℃水浴解离10～15min;5 染色 1％醋酸洋红染色：将解离水洗后的材料吸干，挑取根尖乳白色分生组织于载玻片上夹碎捣烂，滴加1～2滴染液，染色10～20min，压片。 6压片 在经染色的材料上加一滴染液，盖上盖玻片，覆一层吸水纸，用带橡皮头的铅笔垂直敲打，或以拇指垂直紧压盖片(注意勿使盖片搓动)，使材料分散压平，便于观察。;7 镜检 先在低倍镜下寻找有分裂相的视野，再用高倍镜或油镜仔细观察、记数或拍照。 8 临时封片保存 如制片标本符合要求，而又只需要短期(一般在一周以内)保存，可采用石蜡临时封片。用烧红解剖针挑取少量石蜡(或石蜡与凡士林等体积混合物)沿盖片周围封闭。 制作完成的制片标本要贴上标签，注明材料名称、可观察到的有丝分裂典型时期、制片时间、制作者等信息。;五、作业 １ 制作细胞有丝分裂前、中、后、末各期的制片一张，中期应能数清染色体数。贴上标签，注明材料名称，染色方法，制片日期和制作者姓名。 2 绘制所观察到有丝分裂典型时期的染色体图像，并简要说明各时期染色体的行为变化和特征。;;;;;;实验二 植物减数分裂;二、实验原理 减数分裂是发生在配子形成过程中一种特殊形式的有丝分裂。减数分裂包含两次连续的分裂——减数第一分裂和减数第二分裂。通过减数分裂所形成的四分体细胞（或雌、雄配子），其染色体数目只有体细胞的一半。减数分裂过程中染色体出现同源配对、非姊妹染色单体间片段交换、同源染色体相互分离等一系列独特行为。 减数分裂细胞染色体制片取材以高等动、植物雄性生殖分裂较为方便。在适当的时机采集动物精巢或植物花蕾(花序)，经适当技术处理，压片就可在显微镜下观察到细胞的减数分裂过程。;三、实验器材 1.材料 紫鸭跖草的幼嫩花蕾 2.实验器具 显微镜，酒精灯，载玻片，盖玻片，镊子，解剖刀，解剖针，等常用工具。 3.药品 卡诺氏Ⅰ，甲醇冰乙酸（甲醇∶冰乙酸=3∶1）固定液，１mol/L HCI， 45％乙酸；0.5％醋酸洋红，改良苯酚品红，石蜡。;四、实验方法 1．取材 花序基部、花蕾较小，花色尚未变黄变紫，其中必有处于减数分裂的花药。 2．固定 将取得幼嫩花序或花蕾立即投入固定液中，处理12～24h。倒去固定液，用梯度乙醇(95％-80％-70％)依次浸泡漂洗5～30min，直至去除乙酸味。固定后可置70％乙醇中保存。;3．涂抹 用镊子、解剖针等工具取出花药置洁净载玻片上；用洁净的刀片或镊子压在花药上向一端轻轻抹去，将花粉母细胞压挤出来，注意勿使花药太过破碎；将挤出花粉母细胞(呈半透明胶状)小范围内涂成薄层。 4．染色 在涂好的载玻片上滴加一滴或半滴染液，稍后用镊子把所有可见花药壁残渣清除干净。 5．镜检观察 在低倍镜下寻找适当视野，并正确区分处于减数分裂各个时期的花粉母细胞、二分体、四分体以及花粉粒、花药壁残留组织与细胞。;间期;偶线期;双线期;中期Ⅰ;末期Ⅰ;后期Ⅱ;实验三 染色体组型分析;二、实验原理 各种生物染色体的数目、形态和结构都是恒定的。染色体组型，也称为核型，指一个个体或物种的特有的染色体构成，包括染色体数目以及每一条染色体所特有的形态特征（染色体的长度、着丝粒的位置、臂比值、随体的有无、次级缢痕的数目及位置、异染色质的分布等）。核型是物种最稳定的性状和标志，通常在体细胞有丝分裂中期时进行核型的分析鉴定，也可利用减数分裂期的染色体进行分析鉴定。 ; 染色体组型分析就