乳源性促矿物元素吸收肽的制备技术研究.pdfVIP

摘要 摘 要 钙、铁、锌等矿物元素作为对人体非常重要的必需元素，关于如何尽可能增加人 体对膳食中这些矿物元素的吸收已成为近年来研究的热点。促矿物元素吸收肽因其可 以结合钙、铁、锌等离子，且因多肽具有良好的吸收性，故对其相关方面的研究具有 很重要的意义。本课题以乳清蛋白为原料，用胰蛋白酶进行水解，对水解最佳工艺条 件进行了研究，并对水解液进行了超滤分离工艺的研究，将超滤液分别通过 DEAE-Sephadex A25 和葡聚糖凝胶 G-15 进一步分离纯化，初步建立了促矿物元素吸 收肽分离纯化的工艺技术，并得出如下结果。 以水解度和促矿物元素吸收肽活性为指标，在单因素实验的基础上进行了正交试 验，得出酶解制备促矿物元素吸收肽的最佳工艺条件是： pH 为 8.0，底物浓度为 7.0%， 底物:酶为 70 :1，水解时间为 100min，水解温度为45 ℃。 对乳清蛋白的水解液进行了超滤研究，研究了超滤工艺中几个主要参数对膜通量 和促矿物元素吸收肽活性的影响，确定了如下最佳超滤工艺条件：截留分子量为 6000Da 的超滤膜，在超滤压力为0.175MPa，料液初始稀释倍数为4 ，料液pH 为 5.5， 料液温度为 35℃的条件下，能得到纯度最高和活性最大的促矿物元素吸收肽。 采用阴离子交换树脂对超滤液进行了再分离，研究了不同的离子交换树脂对促矿 物元素吸收肽分离效果的影响，得出如下最佳条件：采用φ2.6cm×40cm 的柱体，以 DEAE-Sephadex A25 作为离子交换介质，采用自然沉降法上样，上样浓度为 3.0%， 上样量为 10mL，以NaCl 终浓度为 0.5mol/L 、pH9.0 的NaCl-Tris-HCl 作为洗脱剂， 洗脱速度为 1.0mL/min。之后用最大截留分子量为 500Da 的透析袋进行24h 透析脱盐 处理，得到活性较强的促矿物元素吸收粗肽。 采用葡聚糖凝胶 Sephadex G-15 对经离子交换得到的粗肽进行纯化，确定分离的 最佳条件为：采用φ1.6cm×50cm 的柱体，以 Sephadex G-15 为介质，以超纯水作为洗 脱剂，上样量为 3mL，进样浓度为2.0mg/mL ，洗脱速度为 0.45mL/min 。 采用高效液相色谱对经 G-15 得到的最佳组分进行分离检测，结果发现该组分由 两个组分组成，利用制备柱对其进行分离后测定它们的活性，将其中活性较高的组分 收集做氨基酸组成分析，发现它主要由丝氨酸、苏氨酸和酪氨酸三种含羟基的氨基酸 组成。 该工艺采用传统的酶解工艺水解乳清蛋白，再利用各种色谱技术进行分离纯化， 得到的促矿物元素吸收肽活性较高，且操作工艺简单易行，便于应用和推广。 关键词：乳清蛋白，酶解，促矿物元素吸收肽，分离 I Abstract Abstract Calcium, iron and zinc are all very important essential elements to human bodies. Recently, how to increase the absorption of these mineral elements in daily diets has gradually become a studying focus. The mental-binding peptides can combine the ions like Ca2+, Fe2+, Zn2+ and so forth. Also, it can be well absorbed by human bodies. These two properties are great important for other studies of this field. This thesis chose whey protein