第二军医大学免疫教程二：基因工程Ig幻灯片.pptVIP

免疫球蛋白基因 和基因工程抗体 Immunoglobulin Genes and Genetically Engineered Antibodies 免疫球蛋白基因 Immunoglobulin Genes 免疫球蛋白 (Immunoglobulin, Ig) 抗体 (antibody) 分泌型Ig (secreted Ig, SIg) 膜型Ig (membrane Ig, mIg) 人工制备的抗体 多克隆抗体 (polyclonal antibody) 单克隆抗体 (monoclonal antibody) 基因工程抗体 (genetic engineering antibody) (一)基本结构：Ig单体由两条重链和两条轻链经二硫键连接而成。 Ig的可变区和恒定区 重链可变区 (variable region of heavy chain, VH) 轻链可变区 (variable region of light chain, VL) 重链恒定区 (constant region of heavy chain , CH) 功能区: CH1~3(IgG、IgA、IgD) CH1~4(IgM、IgE) 轻链恒定区 (constant region of light chain, CL) 高变区 (hypervariable region, HVR)又称 互补决定区 (complementarity-determining region, CDR) VH和VL各有3个CDR(CDR1~3), 共同组成 Ig的抗原结合部位。 骨架区(framework region, FR) VH和VL各有4个FR(FR1~4) 胚系Ig基因在基因组中以基因簇(gene clusters)的形式存在。 重链基因簇(IGH)：含V, D, J, C基因片段 IGHV, IGHD, IGHJ, IGHC k轻链基因簇(IGK)：含V,J,C基因片段 IGKV, IGKJ, IGKC ?轻链基因簇(IGL)：含V,J,C基因片段 IGLV, IGLJ, IGLC 人Ig基因片段 基因片段 Ig基因 V D J C IGH 95(50) 23 9(6) 11(9) IGK 90(60) 0 5 1 IGL 60(30) 0 7 7(4) 基因工程抗体(genetic engineering antibody) 一、鼠单抗人源化 人源化抗体(humanized antibody) 免疫原性降低，对各种水解酶的抵抗力增强；可根据需要使抗体连接用于治疗或诊断的相应物质，以增强基因工程抗体的治疗效果或提高诊断的敏感性。 用人抗体的恒定区取代鼠单抗的恒定区，使鼠 单抗恒定区人源化，但保留鼠单抗的可变区。 Fab和F(ab’)2嵌合抗体： 将鼠的功能性抗体轻链和重链可变区 基因分别与人抗体的?链和重链CH1恒定 区基因重组，克隆到表达载体中。 主要通过哺乳类细胞表达，最常用的 是小鼠骨髓瘤细胞系和CHO细胞 。 最大限度地减少鼠单抗的异源性，又能使人单 抗获得鼠单抗的特异性。 二、单价小分子抗体 优点： ①分子量小而穿透力强； ②不含Fc段，可减少副作用； ③能够在大肠杆菌等原核细胞中表达，降 低生产成本； ④在体内半衰期较短，廓清快； ⑤基因操作较容易，可进一步经过改造， 制备其他类型的基因工程抗体。 由重链Fd段和完整的轻链通过一个链间二硫 键连接形成的异二聚体，只有一个抗原结合部位。 (二)Fv和ScFv(single-chain Fv) Fv段由VH和VL籍非共价键结合，是抗体分子中保留抗原结合部位的最小功能片段，其稳定性差。 ScFv： VH-linker-VL或VL-linker-VH Linker一般含