SDSPAGE胶电泳2.pptVIP

同济大学 周智敏 SDS凝胶电泳 实验原理 实验步骤 注意事项 SDS的优点 SDS的缺点 实验常见问题及处理 小技巧 实验步骤 １．试剂配制 　(1) 30%丙烯酰胺（Acr）：称Acr30g，甲叉双丙烯酰胺（Bis）0.8g，加蒸馏水至100ml，过滤后置棕色瓶中。 4℃，1～2月（2）10%SDS（十二烷基磺酸钠）（3）1.5mol/L Tris-HCl缓冲液(pH8.8)： 称取Tris 18.2g, 加入50ml水,用1mol/L盐酸调pH8.8,最后用蒸馏水定容至100ml。 （4）1.0mol/LTris-HCl缓冲液(pH6.8): 称取Tris12.1g,加入50ml水，用1mol/L盐酸调pH6.8,最后用蒸馏水定容至100ml （5）0.05mol/LTris-HCl缓冲液(pH8.0)：称取Tris0.6g,加入50ml水，用1mol/L盐酸调pH8.0,最后用蒸馏水定容至100ml （６）TEMED（四甲基乙二胺） （７）样品溶解液： SDS（100mg）+巯基乙醇（0.1ml）+ 溴酚蓝（2mg）+甘油（2g）+ 0.05mol/L pH8.0Tris-HCl（2ml），最后定容至10ml （８）固定液：50%甲醇454ml，冰乙酸46ml混匀 （９）染色液：称取考马斯亮蓝R250