代谢工程在芳香族化合物微生物降解研究中的应用论文.docVIP

　　代谢工程在芳香族化合物微生物降解研究中的应用论文 摘要：芳香族化合物是一类对环境危害极大的污染物。利用微生物降解此类污染物具有广泛的应用前景，综述了国内外的代谢工程在芳香族化合物的生物降解中的应用研究进展，表明生物修复技术是芳香族化合物污染环境治理最有前景的手段。 关键词：芳香族化合物 代谢工程 基因 质粒 工业技术的迅猛发展，给人类社会带来了高度的物质文明，但也带来了许多负面效应，尤其是对人类生存环境造成的危害。芳香族化合物是一类广泛存在于自然环境中的化学物质，性质稳定，具有很大的毒性和致癌、致突变作用.freelical Engineering of Cellular Processes”的长篇文章，详细讨论了生物网络工程及代谢工程。1996年召开了第一次国际代谢工程会议(ME-I)。此后，国际代谢工程会议定期两年举行一次。1998 年出版了国际上第一部代谢工程教科书：“Metabolic Engineering : Principles and Methodologies”4。1999年出版了“Metabolic Engineering”5专著。近几年的主要研究进展可参见“Current Opinion in Biotechnology”等综述性刊物及其他一些刊物上的综述文章，例如：用代谢工程改进染料生产及使用6；乳酸菌的代谢工程7,.freelt-2中，则可彻底降解苯、甲苯和二甲苯13。 因此，此类物质的降解，主要是经由加氧酶的作用，使得苯环的2，3位羟化，形成不稳定的邻苯二酚类物质，然后开环降解。其中加氧酶起很重要的作用。在甲苯降解过程模拟的基础上对代谢流进行分析，增加甲苯双加氧酶的活力可以使稳态流从0.074增加到0.091。所以，增加甲苯双加氧酶编码基因的拷贝数，可以提高降解菌的降解能力；如果将甲苯双加氧酶编码基因和基因todC1C2BA同时引入上述的P.putida mt-2中，其降解能力也会增强。 2.2 酚类的降解 苯酚是一种常见的酚类物质。苯酚的好氧降解是将苯酚分解为邻苯二酚，邻苯二酚由邻位和间位途径经环裂解，最后形成三羧酸循环中间物。厌氧代谢的第一步是将苯酚羧化为4-羟基苯甲酸。苯酚的降解基因通常成簇排列，位于大质粒上或染色体上。在好氧菌中，苯酚羟化酶基因是降解苯酚的关键基因，编码苯酚降解途径的第一个酶，将苯酚转化为邻苯二酚；邻苯二酚2，3-双加氧酶(C23 O，间位裂解)，或1，2-双加氧酶(CatA,邻位裂解)将邻苯二酚开环裂解为三羧酸产物14，15。如图2所示。 图2 苯酚的降解途径 注：CatA为1，2-双加氧酶；C23 O为2，3-双加氧酶。 Giovanni等16研究了Candida aquaetextoris酵母对4-壬基苯酚（pNP）的生物降解，结果显示，主要的代谢物为对羟基苯乙烯酸和4-乙酰苯酚。进一步的研究认为，对羟基苯乙烯酸可以被继续降解，但4-乙酰苯酚则会积累。通过分析4-乙酰苯酚的分子结构，可以发现它是苯酚的对位衍生物，如果在Candida aquaetextoris酵母中引入苯酚羟化酶基因，使得C.aquaetextoris酵母也可产生苯酚羟化酶，则4-乙酰苯酚也有可能被进一步降解；另外，4-壬基苯酚（pNP）也是苯酚的衍生物，苯酚羟化酶基因的引入，也可能使得pNP第一步就发生羟化，再经由开环而被降解。可以认为，对于其他的苯酚衍生物，如果邻位没有被取代，都可以先由苯酚羟化酶羟化，然后再被降解。 2.3 氯代芳香族化合物的降解 氯代芳香化合物从结构上说是指芳香烃及其衍生物中一个或几个氢原子被氯原子取代后的产物，氯原子的引入引起芳烃本身结构改变，造成氯代芳香化合物的生物降解性比芳烃类化合物要低很多。下面介绍氯苯、多氯联苯等几类物质的降解。 氯苯是化学性质较为稳定的一类化合物。因为氯原子有较高的电负性，强烈吸引苯环上的电子，使苯环成为一个疏电子环，导致很难发生亲电反应。与碳氢化合物相比，由于氯原子的引入其生物降解性大大降低，因此生物处理很难降解氯苯类化合物。但是有些微生物通过自然变种，或通过形成诱导酶，能够将氯苯类化合物降解或部分转化。氯苯类化合物降解的关键在于脱氯，根据脱氯过程中电子得失，将氯苯类化合物生物降解分为氧化脱氯和还原脱氯。 对于氯取代基在3个以下的氯苯，好氧条件下的降解基本上是先开环再脱氯。即在双加氧酶和去氢酶的作用下，将氯苯转化为相应的氯代邻二酚，再由可使苯环发生邻位裂解的酶催化氯代邻二酚邻位开环,生成相应的氯代粘康酸，此产物在内酯化过程中脱除氯原子并被氧化成氯代马来酰基乙酸，最终进入三羧酸循环。一氯苯的降解17如图3所示。 图3 一氯苯的降解途径 在双加氧酶作用下发生双羟基化反应，生成3-氯邻二酚。此中间体邻位裂解后形成2