低氧诱导因子1α在大鼠脑缺血耐受中的表达论文.docVIP

　　低氧诱导因子1α在大鼠脑缺血耐受中的表达论文 【摘要】 目的 探讨脑缺血耐受中低氧诱导因子1α（HIFlα）的表达。方法 84只CAO组，40只）和缺血预处理组（IP+MCAO组，40只）。线栓法阻塞大脑中动脉建立缺血预处理模型，分别于预缺血后1、3、7、14、21 d再缺血2 h，然后取脑经苏木精伊红染色后光镜下进行病理观察，免疫组化方法检测脑组织HIF1α蛋白的表达。结果 IP+MCAO组中1、3、7 d的HIF1α蛋白表达水平与SS+MCAO组中相应时间点比较.freelic model of rats.MethodsHealthy CAO) group (SS+MCAO,n=40) and the ischemic preconditioning and MCAO group (IP+MCAO,n=40). A rat model of focal ischemic preconditioning iddle cerebral artery. At day 1, 3, 7, 4, and 21 after the preconditioning, another tia ental animal. The pathology es of infarct area easured, and the expression of the HIF1α detected via immunohistochemical technique.ResultsThe levels of HIF1α expression in rats of IP+MCAO group at day 1, 3, and 7 after the preconditioning ay be one of the molecular mechanisms in the brain ischemic tolerance. ［KEY CAO组，40只）：分按前述时间点5个亚组；对照组（SS+SS组，4只）。 1.2 模型的制备 缺血预处理参照文献2,3方法进行。再缺血的处理按再灌注的不同时间在规定时间点再次麻醉大鼠，将埋在皮下的线栓推进（18.5±2.0）mm ，再次阻断大脑中动脉造成MCAO，重新结扎ECA近心端，缝合皮肤，2 h后将留在皮外的线栓退出至ECA，形成第2次再灌注，完成再缺血处理。 1.3 实验方法 IP＋MCAO组预缺血10 min后，分别于再灌注1、3、7、14、21 d后阻塞大脑中动脉2 h，再灌注22 h 后处死；SS+MCAO组假手术代替预缺血，在假手术后按前述不同时间点阻塞大脑中动脉2 h, 再灌注22 h后处死；SS+SS组两次均为假手术。 1.4 神经功能缺损评分 参照BEDERSON 等45分制法进行评分。评分累积1分以上认定为造模成功。 1.5 脑组织病理观察 每组随机选取4只大鼠，心脏灌注生理盐水、40 g/L 多聚甲醛各约200 mL，断头取脑，取前囟后3～6 mm部位组织，40 g/L 多聚甲醛后固定,脱水、透明、浸蜡、包埋、切片，片厚5 μm。HE染色后镜下观察组织病理学变化。 1.6 HIF1α蛋白检测 采用SABC法。SABC试剂盒、兔抗鼠HIF1α单克隆抗体（一抗）购自武汉博士德生物工程有限公司。大鼠水合氯醛麻醉后，心脏依次灌注生理盐水、40 g/L多聚甲醛各约200 mL，断头取脑，取前囟后3～6 mm部位组织，多聚甲醛后固定4 h，脱水、透明、浸蜡、包埋、切片，片厚5 μm。每只动物取3张切片，常规脱蜡至水。体积分数0.03的H2O2灭活内源性酶，抗原热修复，滴加1∶200工作浓度的HIF1α单克隆抗体。4 ℃过夜后，依次滴加生物素化二抗、试剂SABC，37 ℃各孵育30 min，DAB显色，镜下控制反应时间。梯度乙醇脱水，二甲苯透明，封片。参照文献5的方法进行观察。 1.7 图像分析 采用Simple PCI显微图像分析系统进行图像分析，测量免疫组化染色的平均吸光度（A）值。 1.8 统计学处理 采用SPSS 11.5软件包进行统计学处理，检测结果以±s表示。各组同一时间点之间比较采用t检验，组内不同时间点比较采用方差分析。 2 结 果 2.1 神经功能缺损评分 SS+SS组神经功能评分为0。IP+MCAO组3、7 d神经功能评分均低于SS+MCAO组，差异具有统计学意义（t=4.025、2.683，P＜0.05）。 SS+MCAO组中各时间点间比较差异无显著性；IP+MCAO组中3 d与其他时间比较，差异具有显著性（F=3.55,P＜0.05）。见表1。表1 各组动物不同时间点神经功能缺损评分比较 2.2 病