静注人免疫球蛋白ACA测定影响因素分析.docxVIP

医学院药学院2011届药学本科学位论文静注人免疫球蛋白抗补体活性（ACA）测定影响因素的探讨学生：年级：2011级专业：药学指导教师：制药工程硕士研究生；副主任技师实习地点：2014 年 03月 10日目 录摘要………………………………………………………………21. 前言…………………………………………………………22. 材料与方法……………………………………………………23. 结果…………………………………………………………44. 讨论…………………………………………………………5参考文献…………………………………………………………5静注人免疫球蛋白抗补体活性（ACA）测定影响因素的探讨摘要：静注人免疫球蛋白(pH 4)(IVIG)是XXXX有限公司生产的具有多种抗体活性的血液制品，因具有广泛的应用价值而受到临床重视。其低pH 值能更好地保证Fc段生物学活性，一般认为少量的IgG 多聚体能暴露出Fc段补体结合位点，从而促使抗补体活性(ACA)产生[1-2]。ACA 是IVIG中一项重要的指标，它指IVIG 中IgG 多聚体在没有结合抗原的情况下，激活补体的能力。IgG 多聚体通过激活补体使补体消耗，从而使机体的免疫防御能力下降。头痛、潮红、颤抖、背痛、恶心是较常见的不良反应症状[3]。因此，ACA的高低对IVIG 的质量起着至关重要的作用。据文献报道[4]，影响ACA 的因素可能与IgG 多聚体含量、Na 浓度、pH 值、葡萄糖的浓度有关。据此，我们进行了研究。另外，还研究发现枸橼酸含量对ACA 也有一定影响。本文就以上因素对其进行实验分析。关键词：静注人免疫球蛋白(IVIG) 抗补体活性（ACA）1.前言静注人免疫球蛋白（PH4）主要组成成分本品蛋白质中95%以上为免疫球蛋白，为无色或浅黄色澄清液体，可带轻微乳光。含有广谱抗病毒、细菌或其他病原体的IgG抗体，另外免疫球蛋白的独特型和独特型抗体能形成复杂的免疫网络，所以具有免疫替代和免疫调节的双重治疗作用。经静脉输注后，能迅速提高受者血液中的IgG水平，增强机体的抗感染能力和免疫调节功能。静注人免疫球蛋白抗补体活性含量检测按《中国药典》2010版三部附录IX K进行测定。2.材料与方法：2.1实验材料2.1.1试剂2.1.1.1氯化钠购白天津海光药业有限公司；2.1.1.2葡萄糖购白天津海光药业有限公司；2.1.1.3枸橼酸购自湖南尔康制药有限公司；2.1.1.4钙镁离子贮备液、巴比妥缓冲贮备液、明胶巴比妥缓冲液、阿氏液均自制；2.1.1.5IVIG(pH 4)样品为本公司用低温乙醇分离法生产的，抽取3批，批号分别201303022.1.2仪器2.1.2.1 721型可见分光光度计为上海第三分析仪器厂产品；2.1.2.2 501型超级恒温水浴箱为上海市实验仪器总厂产品；2.1.2.3 660PH 计为上海英格仪器厂产品；2.1.2.4 LambdaBIO紫外分光光度计为美国PE公司产品。2.1.3 实验动物2.1.3.1 豚鼠15只，雄性，年龄40d，体重400～500g，健康状况良好；2.1.3.2 兔子，2个月龄，雄性，体重1200-1500g，健康良好；2.1.3.3绵羊，雄性，体重33Kg，健康。以上动物均由XXXX有限公司提供。2.2 实验方法2.2.1豚鼠血清(补体)的制备对豚鼠进行心脏采血，放入大试管中，待血凝固后，取出血清，4℃离心除去血细胞，制备混合血清，尽快分装，一70℃保存，也可冻干保存。豚鼠血清每1 ml中的补体总活性应不低于200CH50。2.2.2溶血素兔抗羊红血球血清。用羊红血球免疫兔子，使兔子产生抗体，分离血清制得。2.2.3绵羊红血球由绵羊颈静脉无菌采集全血与等体积的阿氏液混合，无菌分装于试管中，4℃保存1周后方可使用。如未污染细菌可用4周。2.3检测方法2.3.1 ACA 测定按照中国药典2010年版三部附录IX K 中的方法测试3批样品。2.3.2 多聚体含量测定采用中国药典2010年版三部附录III B 高效液相色谱法(HPLC)进行分析，根据峰面积计算IgG多聚体含量。3. 结果：3.1IgG多聚体含量对ACA测定的影响将3批IVIG 样品放入60℃恒温水浴中加热，使之产生IgG多聚体，每隔一定时间取样对其IgG多聚体含量和ACA 测定，结果见表1。结果表明，3批IVIG的IgG多聚体含量对ACA 测定的影响无显著差异(P0．05)。3.2 Na 浓度对ACA 测定的影响将3批IVIG 样品中加入不同浓度的NaCl，将pH值调至7．1(等电点)，测定其ACA，结果见表2。3批检测结果均表明，随着Na 浓度的增加，WIG 样品中ACA有下降趋势。由此可见，Na 浓度对ACA 测定有