实验大鼠相关操作技术.docVIP

一、保定技术 保定的定义，是指使用手或以器械对动物个体之活动作部分或完全之限制，以便进行检查、采样、投药、治疗或进行实验操作等之手段而言。保定无疑是进行所有动物实验前的基本步骤，但在进行实验的过程中也需避免使动物产生不必要的伤害，以下为进行实验动物保定时之重要须知： (一)?不可将保定装置视为正常之饲养方式。 (二)?不可仅仅为处理或控制上图方便，而恣意使用保定装置。 (三)?在可完成实验目的为前提下，需尽量缩短保定之时间。 (四)?在进行保定之前，应训练动物去适应保定设备与进行保定的人员，保定人员也应预先熟练保定相关之技术。 (五)?保定期间若动物有受伤或不适之情形时，则应将动物暂时性或永久性移离保定装置，并进行必要之治疗。 二、大鼠的保定 体型较小、未达120?g的大鼠，可以采用类似保定小鼠的方式。体型较大的大鼠，则应双手保定，由一人执行保定，一人双手采样或投药。也可以采用保定架保定。抓取大鼠时穿戴橡胶手套，可以避免因直接接触大鼠所引起的过敏。尽量避免从大鼠的前方来接触他们，可避免受大鼠咬伤。1.抓取大鼠时可以握住大鼠尾根部，以此对大鼠进行简单的搬运或移动。不可抓取大鼠尾巴末端，抓取末端可能会造成大鼠尾巴的脱落。如将大鼠尾巴提起后大鼠剧烈摇晃反抗，不可突然将抓着尾巴的手放开，大鼠可能会因此而摔伤。2.由大鼠后方慢慢接近，单手轻握住其胸部，再将其提起，另一手可再抓住其尾根部、两只后脚或下腹部。抓起后如大鼠剧烈挣扎，可轻微摇晃，大鼠的挣扎会稍微和缓。抓取时避免将手指至于大鼠嘴巴可及之处，可避免被大鼠咬伤。3.大鼠保定架三、大鼠的采血 采血对非专职实验动物从业人员而言，是一门难度颇高的技术。采血的技术只能靠熟能生巧与细心的摸索正确的手感来精进。采血会造成实验动物较严重的紧迫，因此建议给予适当的麻醉或镇静，可以有助于采血过程的顺畅。成年大鼠的总血量是20至40?ml，单次采血的建议量为2至3?ml，放血可得之总血量是8至12?ml。少量采血时可以使用眼角采血、隐静脉采血、颈静脉采血及尾巴采血，大量采血则采用心脏采血与斩首采血。心脏采血之困难度较高，且需牺牲动物。除非将动物牺牲，否则所有的采血法皆需确认动物的伤口以完全止血不在出血后，才可将动物放回PC笼内。(一)尾部采血： 动物如不麻醉则需以保定器保定。将尾巴置于40温水中或以加热灯照射5至10分钟，使尾巴血管扩张。以23或21G的针头由尾巴左右两侧之尾静脉或腹侧的尾动脉抽血，或仅以21G的蝴蝶针头插入尾动脉中，确认有血液流出后再以离心管承接。 (二)隐静脉（Saphenous?vein）采血: 将动物徒手保定或者将动物塞进适当直径与长度的透明塑料管，藉由固定且紧绷大鼠大腿与尾巴之间的皮肤来伸直其大腿，剔除大腿外侧之皮毛，即可在踝关节的上下端见到隐静脉，将剃毛部位以酒精消毒，以23?G的针头刺开隐静脉，以毛细管收集流出之血液，采得足够之血量后将动物的后脚弯曲以减少开创部位的血流量，再将毛细管内的血液送入微量离心管，最后再以灭菌棉花直接加压开创部位止血。经过24小时候相同部位可以继续采血。 (三)颈静脉（Jugular?vein）采血： 熟练的操作者可以在大鼠清醒时由颈静脉简单的采得血液，动物所受到的紧迫相较于眼角采血或尾静脉采血，会比较低，但建议初学者先将动物镇静或麻醉后再进行采血。将大鼠保定后保持腹部朝上、头部朝向采血者，将大鼠的头部保持笔直并将右侧颈部的毛发剔除，沿着下颚平行于正中线以21?G的针头以极低角度下针，以脖子与肩膀形成的夹角为下针点缓慢推进，待有血液流入针筒后，再缓慢回抽。抽血完成后通常不会造成出血或血肿。(四)眼角采血可麻醉或徒手保定。采血时以巴士德吸管由眼窝前端边旋转边向、向后插入眼窝内静脉丛，待巴士德吸管可见出血时，倾斜巴士德吸管，使血液流入巴士德吸管中。采血时间尽量缩短以避免凝血，采血后需注意止血。采血过程不可过于粗暴而伤及眼球或哈氏腺。 (六)心脏采血： 动物需经安乐死或麻醉后才可进行心脏采血，采血结束也需将动物安乐死。将动物仰卧置于台面，下针的位置位于剑状软骨突下方，约与腹部呈15至30度角向胸腔缓缓推入，一发现有血液流入针筒，即固定针头开始缓慢抽血。或直接由胸腔下针，由胸腔后端1/3处，自胸骨左侧缘垂直经刺入肋骨间而达心脏。 (五)斩首采血法： 此法取得之血液因可能会受动物的其它体液污染。将大鼠摇晃或麻醉使其无法动弹，再以强力的剪刀或断头器将动物斩首后迅速以容器装盛。 四、胃管灌注 胃管灌注能使药剂经胃管直接投入胃中，进行胃管灌注时不可使用一般的针头，需使用经处理过的球型针头，可避免对动物造成伤害。插入之前需先测量动物由口腔至胃的距离选用适当长度的胃管，以避免插入胃管时插入过深造成动物胃的伤害，或是插入过