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棉花 TRIPTYCHON 基因的电子克隆和功能初步验证 摘 要 棉花纤维的长度是评价棉花纤维内在品质的一个很重要的指标，同时单粒籽棉的棉花纤 维数量直接影响棉花皮棉产量。 研究表明，植物表皮细胞的发育受多个基因调控，表皮细胞的发育在不同植物中具有相 似的基因调控模式。棉花纤维是胚珠外珠被表皮细胞发育延伸而成的表皮毛，棉花纤维细胞 的发育与拟南芥表皮毛发育模式相似。拟南芥中存在 GLABROUS1 （GL1）、GLABRA2 （GL2）、 GLABRA3 （GL3 ）、TRANSPARENT TESTA GLABRA1 （TTG1 ）、TRANSPARENT TESTA GLABRA2 （TTG2 ）等基因促进拟南芥表皮毛的发育，同时又存在 TRIPTYCHON （TRY ）和 CAPRICE （CPC）基因抑制拟南芥表皮毛的发育。前人研究报道，棉花中也存在 TTG1、GL1、 GL2 等同源基因促进棉纤维的发育，但是棉花中尚未报道是否存在抑制棉花纤维发育的与 TRY 和 CPC 同源基因。 本研究利用电子克隆和RT-PCR 相结合的方法从徐州 142 无绒无絮突变体棉花中克隆到棉 花 TRY 基因。经过 RT-PCR 克隆后测序，棉花 TRY 基因 ORF （Open read frame ）全长270bp ， 编码 89 个氨基酸，其蛋白质由 18 种氨基酸组成，其基因实测序列的 ORF 碱基序列与电子克 隆的 ORF 的碱基序列仅有一个位点的差异，各自的ORF 翻译为蛋白后，其氨基酸序列仅有一 个位点的差异，表明电子克隆所得基因序列具有很强的真实性。 利用生物信息学分析，该蛋白分子量为 10638.1 Da；理论等电点 pI ：8.66；原子组成是 C H N O S ；消光系数280nm ：19605；不稳定系数是75.26 ；脂肪系数是 61.35 ；总平 461 734 140 136 7 均亲水性为-0.899 。同拟南芥 TRY 蛋白一样，不存在信号肽、糖基化位点、跨膜结构、卷曲螺 旋结构。同拟南芥 TRY 蛋白一样定位于细胞核中，同属于不稳定、疏水性蛋白，MYB 类转录 因子。功能预测表明，棉花 TRY 基因编码的蛋白在细胞内部将执行同拟南芥 TRY 基因编码的 蛋白相似的功能。 将棉花 TRY 基因重组到 pBI121 表达载体上，构建了棉花 TRY 基因的表达载体，同时利用 农杆菌介导的方法将棉花 TRY 基因整合到烟草基因组中。通过实时荧光 PCR 检测，获得阳性 转基因植株。对转基因烟草阳性植株叶毛发育情况和根毛发育情况的观察和分析，初步表明 棉花 TRY 基因具有可以抑制表皮毛发育这一功能。 关键词：棉花；TRIPTYCHON 基因；电子克隆；RT-PCR ；功能；初步验证 I In Silico Cloning of TRIPTYCHON in Cotton (Gossypium hirsutum L.) and Preliminary Confirmation of TRIPTYCHON Gene Function Abstract The length of cotton fiber is one important standard to evaluate the quality of cotton fibre. And the quantity of seed cotton fiber is direct factor to affect ginned cotton harvest. The study reveals that the growth