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比较蛋白质组学研究大鼠感觉与运动神经差异表达蛋白 中文摘要 比较蛋白质组学研究大鼠感觉与运动神经差异表达蛋白 中文摘要 目的 采用相对和绝对定量的等量异位标签 (iTRAQ) 偶联在线二维液相色谱串 联质谱 (2D LC-MS/MS) 的定量蛋白质组学技术，建立大鼠感觉与运动神经的全蛋白 质组表达谱，通过定量分析得到差异表达蛋白；采用UniProt 蛋白数据库和PubMed 等生物信息学工具对全蛋白表达谱和差异表达蛋白根据生物学功能进行分类。从蛋白 水平分析感觉与运动神经功能差异的物质基础，并为进一步深入探讨感觉与运动神经 特异性再生的机制提供科学依据。 方法 1、 根据解剖学结构分离感觉与运动神经，取材备用；提取蛋白样品，采用 Bradford 法测定总蛋白浓度。进行SDS电泳，检测蛋白样品的质量。 2 、 蛋白样品经过丙酮沉淀，酶解，iTRAQ 标记后，使用AnalystTM 1.1 软件控 制Nano-HPLC system 和hybrid Q-TOF mass spectrometer (QSTAR XL) 并采 集数据。 3、 通过ProteinPilotTM 4.0 软件鉴定并定量多肽和蛋白质。 4 、 蛋白质组学分析中获得的全蛋白表达谱和差异表达蛋白通过检索 Uniprot 蛋白数据库和PubMed 数据库，根据其生物学功能进行分类。 5、 通过Western blot 和qRT-PCR 方法分别对感觉与运动神经差异表达蛋白及基 因进行验证。 6、 通过免疫组化染色对感觉与运动神经差异表达蛋白进行定位分析。 结果 1、 根据解剖学结构，成功获得感觉与运动神经。SDS电泳的结果显示感 觉与运动神经蛋白样品品质较佳。 2 、 经 ProteinPilotTM 4.0 软件分析，获得感觉与运动神经全蛋白质组表达谱。以 蛋白置信度 95%或ProtScore 1.3 为限，共鉴定了1472 个非冗余蛋白， 并根据生物学功能分类。 3、 蛋白质组学检测的 1472 个非冗余蛋白以 90% 可信区间计算 117/116 （感 I 中文摘要 比较蛋白质组学研究大鼠感觉与运动神经差异表达蛋白 觉神经/运动神经）的比值，比值≥2.0237 的为感觉神经高表达蛋白；≤ 0.5010 的为运动神经高表达蛋白。结果发现有 100 个显著差异表达蛋白， 其中56 个为感觉神经高表达、运动神经低表达蛋白，44 个为运动神经高表 达、感觉神经低表达蛋白。 4 、 56 个感觉神经高表达蛋白根据生物学功能分类，其中40 个可以分为以下10 类，包括：细胞粘附蛋白、肌动蛋白结合蛋白、钙结合蛋白、信号转导蛋白、 神经元可塑性调节蛋白、酶、脂代谢蛋白、DNA 结合蛋白、SNAP 复合体 蛋白和ATP 结合蛋白，其余16 个归为杂类和未鉴定蛋白。 5、 44 个运动神经高表达蛋白根据生物学功能分类，其中35 个可以分为以下12 类，包括：细胞骨架蛋白、细胞外基质分子、氧化还原通路相关蛋白、神经 营养因子、肌动蛋白结合蛋白、信号转导蛋白、转运蛋白、钙结合蛋白、酶、 酶抑制剂、脂代谢蛋白和ATP 结合蛋白，其余9 个归为杂类和未鉴定蛋白。 6、 通过qRT-PCR 分别对100 个差异表达蛋白中的20 个感觉神经高表达蛋白与 14 个运动神经高表达蛋白进行验证，结果与蛋白质组学的检测一致。 7 、 Western blot 结果显示CALB2，CNPase 和SNAP-25 在感觉神经中高表达， CNTF，NFh