细胞工程-植物细胞培养与次生产物生产.pptVIP

细胞工程 课程初步安排：36学时第一章 　绪论 4个学时第二章 　实验室配置及基本技术 2个学时第三章 植物细胞工程的理论基础 4个学时　第四章 　植物组织器官培养技术 6个学时第五章 　植物细胞培养及次生代谢产物生产 3个学时第六章 　原生质体培养和体细胞杂交 3个学时第七章 　人工种子 1个学时第八章 　植物种质资源离体超低温保存 1个学时第九章　　动物组织培养　　　　　　　　　 3个学时第十章　　动物细胞融合与单克隆抗体 4个学时　　　第十一章　动物组织与胚胎工程 1个学时　　　　　　第十二章　试管动物与克隆动物 2个学时 一 悬浮培养 二 单细胞培养 三 细胞规模化培养 四 培养细胞的次生代谢及产物积累 选择适宜的植物外植体材料 --研究表明，胚、胚轴、子叶是最常使用的外植体 选择适宜的培养基 --较高浓度激素如2,4-D，必要的附加物质如CH等 愈伤组织培养 --进行必要的选择和继代 （二）悬浮细胞系的建立与继代培养 悬浮细胞系的建立与继代培养 （三）细胞生长状态的调控 分选法：是通过细胞体积大小分级，直接将处于相同细胞周期 的细胞进行分选，然后将同一状态的细胞继代培养于同一培养 体系中，则可能保持相同培养体系中的细胞具有较好一致性。 外植体选择 高产细胞系的选择 化学消泡剂： ----具有一定的表面张力和一定的亲水性，以使消泡剂对气/液界面的 分散系数足够大，消泡作用迅速有效； ----化学性质稳定，在水中的溶解度小，不与次生产物起任何化学反应 对植物细胞无毒害； ----不影响气体在营养液中的传递和溶解； ----来源方便，价格便宜； ----常用的化学消泡剂包括天然油脂质、高级醇类、聚醚类和硅酮类， 实际应用中必须根据所培养的植物种类、次生产物特性等具体选择。 机械消泡是靠机械装置实现的。优点是勿需在培养液中加入其它物质，从而减少了由于消泡剂所引起的污染和对后续分离工艺的影响。但效果不如化学消泡迅速彻底同时也会增加培养装置的复杂性。 发状根培养技术和冠瘿组织细胞培养技术 发状根(Hairy root)和冠瘿组织(Crown gall tissue)在离体培养时都具有激素自主、增殖较常规细胞培养快、次生代谢物含量一般比悬浮培养细胞高、能合成某些悬浮培养细胞不能合成的次生代谢物及能引入外源基因表达等特点,从而引起人们利用它们生产药用次生代谢物的重视。 - -利用桔味薄荷(Mentha citrata) 冠瘿细胞生产萜烯 - -利用洋地黄( Digitalis) 冠瘿细胞生产强心甙 - -利用丹参冠瘿细胞生产丹参酮 - -利用长春花冠瘿细胞生产吲哚生物碱 - -利用人参发状根培养生产人参皂甙 - -利用长春花发状根培养生产长春碱 - -利用青蒿发状根培养生产青蒿素 - -利用萝芙木发状根培养生产生物碱 培养液的黏度变化是由细胞密度和细胞状态变化引起的； 烟草培养液的表观黏度主要是由培养细胞密度引起的。当细胞密度低于7g/L时，培养液的黏度基本保持不变，当细胞密度高于此值时，培养液的黏度就增加； 长春花细胞培养，当细胞密度在10g/L时，培养液属于假塑性流体，此时，培养液的黏度依赖于细胞年龄、形态和细胞团的大小。 在相同物质浓度下，大细胞团的营养液表观黏度明显大于小细胞团培养液的表观黏度。 体积氧传递系数(KLa，单位时间单位体积氧量)：如，在4L的气升式反应器中进行长春花细胞培养时，KLa在20h-1左右时，细胞生长与次生产物合成均维持在良好状态；如，在15L的通风式反应器中培养的烟草细胞，KLa值在5～10h-1的范围内随着KLa的增加，生物量和代谢产物也呈线性增加； 溶氧浓度：在不同氧浓度下对毛地黄细胞进行培养，结果显示，当培养基氧浓度从10%饱和度上升至30%时，细胞生长速率从0.15 d-1上升至0.20 d-1，如果溶氧浓度继续上升至40%饱和度时，细胞生长速率反而下降至0.17 d-1。 植物细胞能非光合地利用CO2，如在通气调节过程中，混入2%～4%的CO2即能消除高通气速率对长春花细胞生长和产生代谢产物的不利影响。 植物细胞大规模培养中易产生大量的泡沫，且覆盖有蛋白质和粘多糖，细胞极易被包埋在其中从循环的培养液中带出来，形成非均相培养，从而影响培养系统的稳定性和生产率。 四 培养细胞的次生代谢及产物积累 植物次生代谢及其产物类