02 核酸的结构与功能.ppt

DNA 测序 Maxam-Gibert化学降解法：末端标记 G特异反应：碱性条件下硫酸二甲酯（DMS）作用，G的N7甲基化，在哌啶的作用下脱碱基，磷酸二酯键断裂； 嘌呤特异反应：酸性条件下，G的N7和A的N3甲基化 嘧啶碱基特异反应：肼使嘧啶环打开，水解 C特异反应：高盐（1-2mol/L氯化钠），T被保护 Sanger双脱氧链终止法： 原核生物16S rRNA为1542个核苷酸，其3’-端有一段保守序列ACCUCCU，它是mRNA识别与结合的位点。5S rRNA的第43-47位核苷酸为CGAAC序列，可与tRNA上TψCG核苷酸互补。23S rRNA与16S rRNA相似，通过远距离碱基配对，把整个分子折叠成6个结构区域，每个区域中结构组织与16S rRNA一样，短的螺旋通过中央环和侧环相连接。 真核生物5.8S rRNA上也有CGAAC序列，也是tRNA与rRNA相互识别、相互作用的部位。 4、RNA的结构 16S和5S rRNA二级结构通用模型 由于rRNA分子柔性较大，研究三级结构较困难，目前对rRNA的三级结构还了解较少。 4、RNA的结构 3）信使RNA（mRNA）的结构 mRNA在生物体内，mRNA的含量最小，约占细胞总RNA含量的2%~5%，但是mRNA的种类最多。 原核生物mRNA结构特点 结构简单，转录后一般不需加工直接进行蛋白质翻译； mRNA中往往含有几个功能上相关的蛋白质的编码序列，可翻译出几种蛋白质，为多顺反子（polycistron ）； 无修饰碱基，5’-端没有帽子结构（cap sequence）， 4、RNA的结构 3’-端没有多聚腺苷酸的尾巴（polyadenylate tail），即polyA； 半衰期比真核生物的要短得多，一般认为，转录后1分钟，mRNA降解就开始。 真核生物mRNA结构特点 真核细胞成熟mRNA是由其前体核内不均一RNA（hetero geneous nuclear RNA，hnRNA）剪接并经修饰后才能进入细胞质中参与蛋白质合成。hnRNA含有许多外显子（exon）和内含子（intron），它们分别对应着基因的编码序列和非编码序列。在mRNA成熟过程中，这些 4、RNA的结构 内含子被剪切掉，使得外显子连接在一起，形成成熟的mRNA； hnRNA与mRNA的结构 4、RNA的结构 外显子 内含子 真核细胞mRNA 5’-端有帽子结构：5’-端第一个核苷大多数为7-甲基鸟苷（简写为m7G），它以5’-端三磷酸酯键与第二个核苷酸的5’-端相连。 通常帽子结构有3种类型： 帽子0型：m7G5’ppp5’Np 帽子1型：m7G5’ppp5’NmpNp） 帽子2型：m7G5’ppp5’NmpNmpNp。 4、RNA的结构 帽子结构可保护mRNA不被核酸外切酶水解，并且能与帽结合蛋白结合识别核糖体并与之结合，与翻译起始有关。 真核细胞mRNA 3’-端有多聚腺苷酸尾 （ polyadenylate tail， polyA尾巴）， 它是在mRNA转录完成以后加入的。 polyA与mRNA的寿命有关，没有尾巴或尾巴短的mRNA易降解。少数成熟mRNA没有polyA尾巴，如组蛋白mRNA，它们的半衰期通常较短。 4、RNA的结构 第三节 核酸的理化性质及其应用 1、核酸的一般性质 2、核酸的紫外吸收性质 3、核酸的变性、复性与分子杂交 1、核酸的一般性质 1）性状 RNA及其组分核苷酸、核苷、嘌呤碱、嘧啶碱的纯品都呈白色的粉末或结晶；DNA则为疏松的石棉一样的白色的纤维状固体。 2）溶解性 RNA和DNA都是极性化合物，微溶于水，而不溶于乙醇、乙醚、氯仿等有机溶剂，常用乙醇或异丙醇从溶液中沉淀核酸。 3）粘性 即使是很稀的DNA溶液，黏度也极大，就粘度而言， DNA大于RNA。当DNA溶液在加热或其他因素作用下发生螺旋结构转变为线团结构时，黏度降低，所以可用黏度作为监测DNA变性的指标。 4）水解 DNA和RNA中的糖苷键与磷酸酯键都能用化学法或酶法水解。在很低pH条件下（酸水解），DNA和RNA都会发生磷酸二酯键水解，以及糖苷键水解。高pH（碱水解）通常用于RNA的水解，在这种情况下RNA的磷酸酯键极易被水解，而DNA的磷酸酯键却不易被水解。水解核酸的酶有很多种，按对底物作用方式分类，可分核酸 1、核酸的一般性质 内切酶（endonuclease）与核酸外切酶（exonuclease）