EMMPRIN在甲状腺乳头状癌组织中的表达及意义论文.docVIP

　　EMMPRIN在甲状腺乳头状癌组织中的表达及意义论文 【摘要】 目的：探讨细胞外基质金属蛋白酶诱导因子(extracellular matrix matalloproteinase inducer，EMMPRIN)在甲状腺乳头状癌组织中的表达及临床意义。方法: 收集武汉大学人民医院病理科2004～2009年手术切除及活检的甲状腺乳头状癌标本共40例，另取癌周围组织5例作对照。采用免疫组织化学方法观察各组组织内EMMPRIN的表达。利用HPIAS2000图像分析系统测定EMMPRIN在以上各组中表达的平均光密度和平均阳性面积率。结果：甲状腺癌组织中EMMPRIN呈高表达;癌旁组织中EMMPRIN呈低表达。图像分析结果显示：甲状腺乳头状癌与癌旁组织之间EMMPRIN的平均光密度及阳性面积率的差异有显著性意义(P 0.05)。结论：EMMPRIN过表达在甲状腺癌的发生和发展中起了重要作用。 【关键词】 甲状腺乳头状癌; EMMPRIN; 免疫组织化学; 统计分析 甲状腺癌是头颈部常见的恶性肿瘤,好发于女性和青少年患者。因其病理类型多，故生物学行为差异较大。通常我们依据组织来源及分化程度把它分成四型:乳头状癌，滤泡状癌，髓样癌及未分化癌。而乳头状癌是甲状腺最常见的恶性肿瘤，约占甲状腺癌的60% ～70%1，2.freelatrix matalloproteinase inducer，EMMPRIN) ，广泛地存在于人类各种肿瘤细胞中，刺激与肿瘤有关的成纤维细胞和肿瘤细胞自身的基质金属蛋白酶类合成增加，进而降解基底膜组成成分和细胞外基质，促进恶性肿瘤的转移3，4。 本研究采用免疫组化和图像分析方法检测和分析了乳头状腺癌中EMMPRIN的表达，探讨EMMPRIN在甲状腺癌的发生和发展中的作用机制。 1 材料与方法 1.1 材料 1.1.1 材料来源 收集武汉大学人民医院存档甲状腺乳头状癌蜡块40例。其中，男12例, 女28例，年龄23～68 岁。甲状腺癌组患者术前均未做放、化疗。 1.1.2 材料分组 蜡块切片厚5μm,帖片于涂有多聚赖氨酸的洁净载玻片上，置于烤箱烤干待用。常规HE染色，用免疫组织化学SP法检测EMMPRIN在各组中的表达,另取5例瘤旁组织为对照组。 1.2 主要试剂和仪器 1.2.1 主要试剂 ①浓缩型鼠抗人EMMPRIN单克隆抗体 (北京中杉生物技术有限公司) ;②超敏即用型SP通用型免疫组织化学试剂盒(北京中杉生物技术有限公司) ;③显色试盒及多聚赖氨酸(北京中杉生物技术有限公司)。 1.3 方法 1.3.1 免疫组织化学SP法检测EMMPRIN相关抗原 主要步骤： 5μm组织切片常规脱蜡至水，3%过氧化氢处理10 min以抑制内源性过氧化物酶活性，EMMPRIN采用微波抗原修复(3档，10 min)，正常羊血清37℃孵育10 min以减少非特异性反应，一抗37℃孵育1h，生物素标记的二抗，37℃孵育10 min，SP复合物处理10 min ，DAB显色液显色，自来水冲洗终止反应，苏木精复染，脱水，透明，封片。用磷酸缓冲液(PBS)代替一抗作为阴性对照。 1.3.2 免疫组织化学结果判断 以胞浆出现棕黄色颗粒为阳性反应。阴性对照除细胞核染成蓝色外，胞浆内无棕黄色反应物。 采用HPIAS2000高清晰度彩色病理图文报告管理系统(同济千屏影像公司)对EMMPRIN的表达进行定量分析，每张切片随机选取5个完整而不重叠的高倍镜视野(×400)，测定每个视野EMMPRIN的阳性反应的平均光密度、阳性反应面积和所有细胞总面积，计算阳性面积率(阳性面积率=单位面积中阳性反应的总面积/单位面积中细胞的总面积×100%)。以每例5个视野的平均光密度、阳性面积率的平均值作为该例的测量值。 1.4 统计学处理 对各组免疫组织化学反应阳性颗粒的平均光密度、阳性面积率作单因素方差分析和SNKq检验，检验水准α为0.05。 2 结果 EMMPRIN的表达 癌旁组织中无棕黄色颗粒沉积，EMMPRIN呈阴性表达;甲状腺乳头状癌组织内可见密集分布的棕黄色颗粒，EMMPRIN表达呈阳性。图像分析结果显示：甲状腺乳头状癌EMMPRIN的平均光密度为0.1833±0.0072;癌旁组织EMMPRIN的平均光密度为0.0451±0.0014。甲状腺乳头状癌EMMPRIN的阳性面积率为0.1985±0.0075;癌旁组织EMMPRIN的阳性面积率为0.0357±0.0013。经q 检验，甲状腺乳头状癌与癌旁组织之间，EMMPRIN的平均光密度及阳性面积率有显著性差异(P 0.05)。见表1。表1 甲状腺乳头状癌与癌旁组织中EMMPRIN表达的平均光密度和阳性面积率* 注：甲状腺乳头状癌与癌旁组织比较，P 0