FK506治疗大鼠早期膜性肾病的实验研究论文.docVIP

　　FK506治疗大鼠早期膜性肾病的实验研究论文 贾冶 王晶 顾华 吴曼 郭桥艳 徐锋 刘庆鑫 许钟镐 苗里宁 【摘要】 目的 观察FK506治疗大鼠膜性肾病的疗效。方法 复制组)，FK506治疗组(FK506组)，每组12只。用阳离子化牛血清白蛋白制作大鼠膜性肾病模型,于正式免疫开始后2、4、6、8 embranous nephropathy in rat. Methods Membranous nephropathy rats al control (N),membranous nephropathy (M),and FK506 treatment (FK506) groups. Urinary protein excretion easured at 2, 4, 6, 8 the beginning of immunization. The rat blood oved. The blood samples easuring the levels of serum BUN, Scr and ALB. Kidney specimens icroscopy. Immunohistochemistry method ed to observe the expressions of TGFβ1 and NFκB. TGFβ protein expression easured by ALB in group M munohistochemical findings. Conclusions ALB munohistochemistry shoprove kidney pathological changes, inhibit TGFβ1 overexpression and NFκB activation in renal tissue of membranous nephropathy rats,.freelent of early membranous nephropathy. 【Key branous nephropathy 膜性肾病(membranous nephropathy，MN)是中老年人常见的肾脏疾病，临床以无症状蛋白尿或肾病综合征为主要表现，病理以肾小球基底膜(GBM)上皮细胞下弥漫的免疫复合物沉着伴基底膜增厚为特点。MN的病因及机制尚不清楚，目前治疗主要应用激素加免疫抑制剂。FK506做为一种新型的免疫抑制剂，目前主要用于器官移植，并且在治疗特异性皮炎、系统性红斑狼疮、自身免疫性眼病等疾病中发挥作用，而在治疗肾小球肾炎，尤其是MN方面的研究尚少。本实验观察FK506对MN模型大鼠24 h尿蛋白定量、肾功能、肾组织TGFβ1、NFκB的影响，旨在探讨FK506对MN的治疗作用及其机制。 1 材料与方法 1.1 主要试剂和材料 FK506(爱尔兰藤泽药品有限公司)，牛血清白蛋白(上海缘聚生物科技有限公司)，碳化二亚胺(沈阳国药集团)，兔抗大鼠TGFβ1多克隆抗体(北京莱博生物实验材料研究所)，兔抗大鼠NFκB p65多克隆抗体(NFκB)(武汉博士德生物工程有限公司)，考马斯亮蓝法测尿蛋白试剂盒(南京建成生物工程有限公司)，免疫组织化学试剂盒(美国Dako Corporation)。 1.2 方法 健康N模型，根据实验用药，将动物随机分为3组，每组12只。正常对照组(N组);模型组(M组)，不予任何药物治疗;FK506治疗组(FK506组)，由开始正式免疫第3周起每天给予FK506(2 mg/kg)灌胃，共4 in，3 000 r/min，取血清保存在-70℃冰箱待测血肌酐(Scr)、尿素氮(BUN)、白蛋白(ALB)水平。最后剖开腹腔，游离肾脏，取多块肾组织，一部分在-70℃冰箱保存，一部分置于10%中性甲醛溶液中固定。 1.3 免疫组织化学法 采用免疫组化染色法，检测肾组织中TGFβ1和NFκB的表达情况。石蜡切片常规脱蜡水化;1% H2O2作用15 min，PBS洗;0.05%胰蛋白酶液37℃作用30 min，PBS洗;10%正常山羊血清孵育15 min抑制非特异性结合;滴加TGFβ1和NFκB一抗，4℃过夜，PBS洗;滴加二抗(生物素化兔抗鼠IgG)，37℃孵育30 min，PBS洗;滴加复合物(链霉素抗生物素蛋白过氧化物酶溶液)，37℃孵育30 min;DAB显色，水洗后用苏木素复染，透明封片。 1.4 N模型的建立 实验中发现大鼠自正式免疫后2 il ES,et al.Induction of membranous nephropathy in rabbits by administration of an exogenous cationic