HPLC法检测血清中伏立康唑含量的研究论文.docVIP

　　HPLC法检测血清中伏立康唑含量的研究论文 【摘要】 目的 建立人体血清样本中伏立康唑含量检测方法。方法 色谱柱为依利特C18柱（5μm，4.60mm×200mm）；流动相为水：乙腈：冰醋酸：三乙胺＝64：36：0.1：0.05；流速：1.2ml/min；检测波长:258nm。结果 伏立康唑在0.14～13.96μg/ml浓度范围内呈良好的线性关系，r=0.998。结论 实验建立的HPLC方法可以用于血清样本中的伏立康唑含量检测。 【关键词】 伏立康唑 血清样本 HPLC 含量测定 【Abstract】 Objective To establish a method to determinate the voriconazole content in human serum samples.Methods Eliter C18 column （200mm×4.6mm,5μm） obile phase of ine （64:36:0.1:0.05）.The flol.min-1and the . Results The calibration curve l（r=0.998）.Conclusion The established HPLC method can be used in the determination of voriconazole content in human serum. 【Key sample;HPLC;determination 伏立康唑（voriconazole,VRC）是一个三唑类抗真菌药物，其作用机制是抑制真菌细胞色素p450依赖的14α-固醇脱甲基酶，而本品对于真菌细胞色素p450酶比对各种哺乳动物的细胞色素p450酶系统更具选择性。伏立康唑在0.03～64μg/ml的浓度范围内对几乎所有的实验真菌，包括致病性酵母菌和丝状菌属及双芽生菌的分离菌株均有作用。对一些条件致病真菌如曲霉菌属、隐球菌属及念珠菌属包括对氟康唑耐药的克柔念珠菌均有抗菌活性。本实验旨在建立血清样本中伏立康唑浓度检测方法。 1 实验材料 伏立康唑对照品，中检所提供。卡马西平对照品，中检所提供。乙腈：色谱纯.freelpo，4.60mm×200mm）；流动相为水：乙腈：冰醋酸：三乙胺＝64：36：0.1：0.05；流速：1.2ml/min；检测波长：258nm；柱温：室温。 2.2 标准液制备 精密称取伏立康唑对照品0.0340g，加甲醇溶解于50ml容量瓶中并稀释至刻度,即得698μg/ml的伏立康唑对照品溶液。精密称取卡马西平对照品0.0050g，用流动相溶于100ml容量瓶中并稀释至刻度，即得50μg/ml的内标溶液。 2.3 血浆样品的处理 取血浆0.2ml，内标10μl（卡马西平50μg/ml），混匀，再加入0.5ml甲醇，旋涡振荡0.5min，16000r/min离心5min; 吸取上清液100μl进样。3 方法学研究 3.1 专属性 在选定的色谱条件下，伏立康唑与内标卡马西平完全分离，且峰形良好，两者保留时间分别约为 8.4min和5.4min，空白血浆、空白血浆加药物及内标、含药血浆加内标按4法处理后，色谱图见图1。Ⅰ: 空白血浆；Ⅱ: 空白血浆加药；Ⅲ:含内标血浆；IV：2号受试者用药后2h色谱图 A：卡马西平, B：伏立康唑 图1 伏立康唑色谱图3.2 标准曲线及线性回归方程 用伏立康唑对照品溶液（698μg/ml）配制标准曲线工作液：将698μg/ml对照品溶液依次用流动相稀释，得到2.79、8.37、27.92、55.84、139.60、279.20μg/ml。 取空白血浆0.19ml分别置于系列试管中，分别加上述标准曲线溶液各10μl，配制成血浆浓度为样，按上0.14、0.42、1.40、2.79、6.98、13.96μg/ml的血浆标述4方法处理血浆样品，测定样品及内标的峰面积，计算其峰面积比值（伏立康唑/卡马西平，A），以峰面积比值A对血浆浓度C进行线性回归分析，求得线性回归方程为： C = 5.117 A +0.024 （l浓度范围内，线性关系良好，血浆样品可进行定量检测的最低浓度为0.14μg/ml。见图2。 图2 伏立康唑血浆标准曲线 3.3 绝对回收率 各取空白血浆0.19ml于15个空白试管中，5个为一组，分别加入8.37μg/ml（低浓度）、55.84μg/ml（中浓度）、139.60μg/ml（高浓度）伏立康唑对照品溶液10μl。得浓度为 0.42μg/ml、2.79μg/ml、6.98μg/ml的血浆样品。按上述4方法处理血浆样品，进样100μl，记录色谱峰面积。 另外，用纯水代替血浆重复以上步骤，记录色谱峰面积。以此为标准，将两组峰面积进行比较