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　　HPLC法测定丹参脂溶性成分的含量论文 【摘要】运用HPLC技术分析丹参脂溶性成分组成，并建立了四种丹参脂溶性成分的HPLC含量测定方法。采用Agilent Zorbax SB-C18色谱柱(4.6×250mm, 5μm)，以乙腈-水-乙酸为流动相进行梯度洗脱，流速为1.0mL min-1，检测波长为280nm。通过与对照品比较，建立HPLC分析方法同时测定隐丹参酮、二氢丹参酮、丹参酮I和丹参酮IIA四种脂溶性成分的含量，该方法的重复性RSD小于2.0%，平均回收率为98.3～101.6%。本文所建立的方法操作简便快速.freelethod for simultaneous determination of main tanshinones of Salvia miltiorrhiza．Four tanshinones n(4．6 mm×250 mm，5μm)．A gredient elution ed by using methanol-obile phase．The floL min-1 ．The RSD of the repeatability ethod is rapid，easily operated，reliable and could be used for the quality control of Salvia miltiorrhiza． 【Key station色谱工作站)。 1.2试药 丹参酮I、丹参酮IIA对照品购自中国生物药品检验所，二氢丹参酮、隐丹参酮对照品购自长沙上河生物科技有限公司。甲醇、乙腈为色谱纯(美国Merck公司)，丹参药材购自安徽亳州中药材市场。 1.3试液制备 1.3.1对照品贮备液:取对照品二氢丹参酮、隐丹参酮、丹参酮I、丹参酮IIA适量，精密称定，加入甲醇制成对照品混合液，即得。 1.3.2供试品溶液的制备:取丹参5g，加入甲醇50mL，超声处理30min，放冷，用甲醇补足减失的重量，摇匀，微孔滤膜滤过即得。 1.4色谱分析条件 色谱柱: Agilent Zorbax SB-C18色谱柱(4.6×250mm, 5μm，Agilent公司)，流动相A为0.1%乙酸溶液，流动相B为乙腈，梯度洗脱：0-5min时65%B，10～30min时70%B，40 min时95%B，流速1.0mL/min，柱温35℃，检测波长280 nm，进样量20μL。 2 实验结果与讨论 2.1线性关系考察 逐级稀释对照品储备液1-100倍得到8个不同浓度的对照品溶液，按1.4项下的色谱条件进行分析，以峰面积为纵坐标，对照品溶液浓度为横坐标，绘制工作曲线，计算各对照品的回归方程，见表1。 表1 四种丹参脂溶性成分线性回归方程 2.2精密度试验 按1.3.2项下方法制备供试品溶液，按1.4项下色谱条件连续进样6次，测定峰面积，计算精密度。二氢丹参酮RSD 0.88%，隐丹参酮RSD 0.42%，丹参酮I的RSD 0.26%，丹参酮IIA的RSD 0.28%。 2.3重复性试验 按1.3.2项下方法制备同一批供试品溶液5份，计算每克丹参药材中各成分含量。二氢丹参酮含量0.74mg g-1，RSD 1.86%;隐丹参酮含量1.34 mg g-1，RSD1.32%;丹参酮I含量3.23 mg g-1，RSD1.03%;丹参酮IIA含量1.75mg g-1，RSD0.89%。 2.4稳定性试验 按1.3.2项下方法制备供试品溶液，按1.4项下色谱条件连续7天内进样测定，每天连续进样3次，测定峰面积，计算二氢丹参酮RSD 1.42%，隐丹参酮RSD 0.95%，丹参酮I的RSD 0.93%，丹参酮IIA的RSD 0.77%，表明样品溶液至少在一周内稳定。 2.5加样回收试验 配制二氢丹参酮0.253mg mL-1、隐丹参酮0.469 mgmL-1、丹参酮I 1.012mg mL-1、丹参酮IIA 0.778 mgmL-1的对照品溶液10mL。分别精确量取0.8，1.0，1.2 mL的对照品溶液各3份于锥形瓶中，挥干，每份加入精密量取丹参药材粉末约2g，混合均匀，精密加入25mL甲醇，按1.3.2项下方法制得供试品。按1.4项下色谱条件进行HPLC分析，每个样品进样3次，计算平均加样回收率。各物质平均加样回收率分布在98.3%-101.6%之间，符合检测要求。 2.6样品测定结果 取丹参药材，粉碎过筛，按1.3.2项下方法分别制备供试品溶液各5批，按1.4项色谱条件分析，每个样品进样3次，计算1g丹参药材中二氢丹参酮、隐丹参酮、丹参酮I和丹参酮IIA的含量分别为0.71mg g-1、1.32mg g-1、3.34mg g-1、1.