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　　HPLC法测定广东土牛膝中腺苷的含量论文 卢绮雯，李坚，萧鹏，谢艳婷 【摘要】 目的 测定广东土牛膝中腺苷的含量。方法 采用反相高效液相色谱法，色谱柱：DiamonsilTM C18柱，流动相：甲醇磷酸盐缓冲溶液（体积比12∶88），流速：1. 0 mL·min-1 ，检测波长260 nm.freeline the content of adenosine in Radix Eupalorri Chinense Linn by RPHPLC. Methods Samples onsilTM C18 column（250 mm×4.6 mm，5 μm） using CH3OHNaH2PO4·Na2HPO4(12∶88)as mobile phase. The floL·min-1 and the detection . Results The method exhibited good linearity from 0.0396 to 0.6336 μg. The average recovery for adenosine ethod could be used to determine adenosine content in Radix Eupalorri Chinense Linn. Key L，称定重量，超声处理45 min，放冷，再称定重量，用50%（体积分数）甲醇补足减失重量，摇匀，滤过，取续滤液即得。 2.1.2对照品溶液 精密称取腺苷对照品9.90 mg，置50 mL量瓶中，加50%（体积分数）的甲醇适量，振摇使溶解，再加50%（体积分数）的甲醇稀释至刻度，摇匀，得浓度为198 μg· mL-1的腺苷对照品贮备液。 2.2色谱条件及系统用性试验 色谱柱：DiamonsilTM(钻石) C18柱（250 mm×4.6 mm，5 μm，迪马公司）；流动相：甲醇磷酸盐缓冲溶液［取0.01 mol·L-1磷酸二氢钠68.5 mL与0.01 mol·L-1磷酸氢二纳31.5 mL混合（pH＝6.5）］ （体积比12∶88）；流速：1.0 mL·min-1，检测波长：260 nm；柱温：30 ℃。分别取对照品溶液（腺苷浓度为7.92 μg· mL-1），供试品溶液20 μL注入色谱仪，按上述色谱条件，记录色谱图（图1,2）。腺苷和样品中相邻色谱峰的分离度大于1.5；理论塔板数以腺苷峰计算不低于3 000；保留时间约为17.40 min。 图1腺苷对照品HPLC图 略 图2广东土牛膝药材样品HPLC图 略 2.3方法学考察 2.3.1线性与范围 分别精密吸取一定量的对照品贮备液用50%（体积分数）的甲醇稀释成浓度为1.98、3.96、7.92、15.84、23.76、31.68 μg· mL-1的对照品溶液，分别取20 μL进样测定，以峰面积（A）对对照品质量浓度（ρ）进行回归，得回归方程A=32 416.91ρ+1 071.34，r=0.999 9，试验表明腺苷在0.039 6～0.633 6 μg之间与峰面积线性关系良好。 2.3.2精密度试验 取质量浓度为7.92 μg· mL-1的腺苷对照品溶液20 μL，连续测定5次，记录峰面积并计算，结果腺苷峰面积的平均值为256 682，RSD为0.72%，表明仪器精密度良好。 2.3.3稳定性试验 取土牛膝供试品溶液（批，在0、2、4、8、12 ｈ分别进样20 μL，记录峰面积，结果腺苷峰面积的平均值为229 720，RSD为1.69%，表明供试品溶液在12 h内稳定。 2.3.4重复性试验 取同一批号（批样品6份，按“2.1.1”项下方法制备溶液，分别进样测定，结果腺苷平均含量为0.1406 mg·g-1，RSD为1.15%，表明分析方法精密度良好。 2.3.5加样回收试验 精密称取已知含量（批土牛膝样品约0.5g，共9份，分别用刻度吸量管精密加入浓度为198 μg· mL-1的腺苷对照品溶液0.23、0.23、0.23、0.36、0.36、0.36、0.50、0.50、0.50 mL，按“2.1.1”项下方法制备供试品溶液，在上述色谱条件下进样20 μL进行分析，结果见表1。 表1腺苷回收率试验结果 略 2.4样品测定 取土牛膝样品3批，按“2.1.1”项下方法制备供试品溶液，分别取7.92 μg· mL-1的对照品溶液与供试品溶液各20 μL，注入液相色谱仪，测定，计算腺苷的含量，结果见表2。 表2样品的测定结果（略） 3讨 论 3.1提取溶剂的选择分别用不同体积分数（30%、50%、70%、90%）甲醇混合液进行试