16-经典液相色谱法.pptVIP

* 第16章 经典液相色谱法 * 16.1 概述 液相色谱法：以液体为流动相的色谱法称～。 经典液相色谱：固定相颗粒较大且不均匀 常压下输送流动相 柱效较低 分析周期长 现代液相色谱：固定相颗粒小且均匀 高压下输送流动相 柱效较高 分析周期短 * 16.2.1 分离原理 16.2 液-固吸附柱色谱法 16.2.2 吸附剂 1. 硅胶 2. 氧化铝 3. 聚酰胺 吸附色谱法是以吸附剂为固定相的色谱法 各组分与流动相分子争夺吸附剂表面活性中心 利用吸附剂表面的活性吸附中心对不同组分的吸附能力差异而实现分离 * 1. 硅胶（SiO2·xH2O） 结构：内部——硅氧交联结构→多孔结构 表面——有硅醇基→氢键作用→吸附活性中心 特性： 1）与极性物质或不饱和化合物形成氢键 物质极性↑，吸附能力↑→强极性吸附中心，不易洗脱 2）吸水→失活 →105～110OC烘干30分钟(可逆失水)→吸附力最大 →500OC烘干(不可逆失水)→活性丧失，无吸附力 适用：分析酸性或中性物质 * 2. 氧化铝 碱性氧化铝 pH 9～10 适于分析碱性、中性物质 中性氧化铝 pH＞7.5 适于分析酸性碱性和中性物质 酸性氧化铝 pH 4～5 适于分析酸性、中性物质 3. 聚酰胺 氢键作用 氢键能力↑强，组分越后出柱 * 16.3 色谱条件的选择 1. 被测物质的结构与性质（极性大小）： 烃＜醚＜硝基＜二甲胺＜酯＜酮＜醛＜硫醇＜胺类 ＜酰胺＜醇＜酚＜羧酸 2. 吸附剂的选择： 吸附剂的活性↑大，对被测组分的吸附能力↑强 强极性物质——选择弱吸附剂 弱极性物质——选择强吸附剂 依据被测组分、吸附剂和流动相的性质 * 4. 三者关系图示： 组分 吸附剂 流动相 极性 活性小 极性 非(弱)极性 活性大 非极性或弱极性 3. 流动相的极性： 流动相极性↑大，对被测物质的洗脱能力↑大 “相似相溶”原则 ：根据组分性质、吸附剂的活性， 选择适当极性的流动相 石油醚环己烷四氯化碳苯甲苯乙醚氯仿醋酸乙酯正丁醇丙酮乙醇甲醇水 * 16.4 平面色谱参数 16.4.1 定性参数 1. 比移值（Rf）表示被分离组分的移动情况 L0 L1 L2 Rf范围：0 Rf 1 （组分迁移速度和距离小于展开剂迁移速度和距离） Rf = 0.2——0.8（常用） 0.3——0.5（最佳） * 讨论 Rf与K有关，即与组分性质（溶解度）以及薄层板和展开剂的性质有关 色谱条件一定，Rf只与组分性质有关，是薄层色谱基本定性参数，说明组分的色谱保留行为 K↑大，Rf↓小 薄层板一定，对于极性组分 展开剂极性↑大，Rf↑大（容易洗脱） 展开剂极性↓小，Rf↓小 （不容易洗脱） * 2. 相对比移值（Rr） 讨论 参考物与被测组分在完全相同条件下展开 可以消除系统误差，大大提高重现性和可靠性； 参考物可以是后加入纯物质，也可是样品中已知组分 相对比移值Rr与组分、参考物性质及色谱条件有关，范围可以大于或小于1 * 16.4.3 分离参数 1. 分离度 R=2d/(W1+W2) d—两斑点中心间的距离 W1、W2—分别为两斑点的宽度 2. 分离数 相邻斑点的分离度为1.177时，在Rf=0和Rf=1两组分色谱斑点间能容纳的色谱斑点数。 分离数是衡量平面色谱分离容量的主要参数，也是板效的评价参数。 R=2l0(Rf2-Rf1)/(W1+W2) * 16.5 薄层色谱法 1．定义：将固定相均匀涂布在表面光滑的平板上，