葡萄4 种病毒多重RT-PCR 检测体系的建立.pdfVIP

园 艺 学 报 2012 ，39 （5 ）：949 –956 http: // www. ahs. ac. cn Acta Horticulturae Sinica E-mail: yuanyixuebao@126.com 葡萄4 种病毒多重RT-PCR 检测体系的建立 * 范旭东，董雅凤 ，张尊平，任 芳，李亚惠 （中国农业科学院果树研究所国家落叶果树脱毒中心，辽宁兴城 125100 ） 摘 要：以复合感染4 种病毒的‘红地球’（Red Globe ）葡萄样品为试材，对影响多重PCR 的 dNTPS 浓度、Taq 酶浓度、引物浓度、退火温度及模板量进行了调整和优化，建立了能同时检测葡萄卷叶伴随病 毒 3 （Grapevine leafroll-associated virus-3，GLRaV-3 ）、沙地葡萄茎痘相关病毒 （Grapevine rupestris stem pitting associated virus ，GRSPaV ）、葡萄病毒 B （Grapevine virus B，GVB ）和葡萄病毒 A （Grapevine virus A ，GVA ）的多重 RT-PCR 方法。灵敏度测验结果显示，多重 RT-PCR 与单一 RT-PCR 检测灵敏度基本一 致。多重 RT-PCR 获得的特异性片段大小分别为 905、546、460 和 196 bp，经过克隆、测序及序列比对， 表明其序列与已报道的病毒序列具有较高的同源性。对 7 个已知带病毒的葡萄样品进行检测验证的结果 表明，所建立的多重 RT-PCR 技术可用于大量田间样品中这些病毒的检测。 关键词：多重 RT-PCR ；检测；葡萄卷叶伴随病毒 3 ；沙地葡萄茎痘病毒；葡萄病毒B ；葡萄病毒A 中图分类号：S 663.1 文献标识码：A 文章编号：0513-353X （2012 ）05-0949-08 Multiplex RT-PCR for Simultaneous Detection of Four Grapevine Viruses * FAN Xu-dong ，DONG Ya-feng ，ZHANG Zun-ping ，REN Fang ，and LI Ya-hui （National Center for Eliminating Viruses from Deciduous Fruit Tree ，Research Institute of Pomology ，Chinese Academy of Agriculture Sciences ，Xingcheng ，Liaoning 125100 ，China ） Abstract ：Using the ‘Red Globe ’infected by four grapevine viruses as a sample，the concentrations of dNTPs，Taq DNA polymerase ，the primers ，annealing temperature and template quantity were optimized for the simultaneous detection of four viruses Grapevine leafroll-associated virus-3 （GLRaV-3 ）， Grapevine rupestris stem pitting associated virus （GRSPaV ），Grapevine virus B （GVB ），Grapevine virus A （GVA ） by multiplex RT-PCR. Comparison of the sensitivity of both multiplex-and single RT-PCR for the detection of those viruses showed no significant differences. The target