葡萄果实葡萄糖苷酶基因克隆、原核表达及活性检测.pdfVIP

园 艺 学 报 2012 ，39 （6 ）：1073 –1080 http: // www. ahs. ac. cn Acta Horticulturae Sinica E-mail: yuanyixuebao@126.com 葡萄果实 β–葡萄糖苷酶基因克隆、原核表达及 活性检测 董银行，郭家选* （北京农学院植物科学技术学院，农业应用新技术北京市重点实验室，北京 102206 ） 摘 要：以‘玫瑰香’葡萄着色期的果肉为试材，通过反转录技术克隆了ABA 合成相关酶 β–葡萄 糖苷酶基因 VvBG1 的 1 518 bp 编码区核苷酸序列，其编码 1 个含有 505 氨基酸的多肽。生物信息学分析 表明，VvBG1 含有 1 个跨膜区和糖基水解酶 1 超家族保守域。通过 BamH Ⅰ和Xho Ⅰ限制性内切酶将除 去信号的编码区克隆到原核表达载体 pET28a （+ ）中，并转化大肠杆菌表达菌株BL21 （DE3 ），成功诱导 并纯化了 VvBG1 融合蛋白。经过透析复性和超滤浓缩得到了 0.8 mg · mL-1 可溶的融合蛋白。通过纯化蛋 白葡萄果肉均浆液孵育试验和GC –MS ABA 含量分析证实了葡萄果实中 β–葡萄糖苷酶VvBG1 具有较 高的生理活性。 关键词：葡萄；果实；β–葡萄糖苷酶1；脱落酸；基因；克隆；原核表达 中图分类号：S 663.1 文献标识码：A 文章编号：0513-353X （2012 ）06-1073-08 Cloning，Procaryotic Expression and Activity Analysis of Grape Berry β-glucosidase Gene * DONG Yin-hang and GUO Jia-xuan （Beijing Key Laboratory for Agricultural Application and New Technique ；College of Plant Science and Technology， Beijing University of Agriculture ，Beijing 102206，China） Abstract ：To explore the activity of β-glucosidase （VvBG1 ）in grape berries，in the present study， VvBG1 gene was first cloned through reverse transcription technique from mesocarp during Hamburg grape berry red-coloring stages. The 1 518 bp sequences encoded a polypeptide with 505 amino acids. Bioinformatics analysis showed that VvBG1 contains both a putative transmembrane region and a glycosyl hydrolase1 superfamily domain. The coding sequence after remove of its signal coding region was cloned into prokaryotic expression vector pET28a （+ ）and then transformed into E. coli strain BL21 （DE3 ）by restriction endonucleases BamH Ⅰand Xho Ⅰ. The recombinant strains were successfully induced t