梨贝壳杉烯酸氧化酶基因PcKAO的克隆与表达分析.pdfVIP

园 艺 学 报 2013 ，40 （5 ）：849 –858 http: // www. ahs. ac. cn Acta Horticulturae Sinica E-mail: yuanyixuebao@126.com 梨贝壳杉烯酸氧化酶基因 PcKAO1 的克隆与表 达分析 * 欧春青，姜淑苓 ，王 斐，王志刚，马 力，李连文 （中国农业科学院果树研究所，农业部园艺作物种质资源利用重点实验室，辽宁兴城 125100 ） 摘 要：以梨矮化砧木‘中矮 1 号’新梢叶片为试材，根据苹果基因组中相关序列信息设计特异引 物，通过 RT-PCR 的方法克隆了梨赤霉素合成过程中关键酶——贝壳杉烯酸氧化酶（KAO ）基因的编码 框全长序列。该序列全长 1 568 bp，开放阅读框（ORF ）编码503 个氨基酸，相对分子量为 57.59 kD，等 电点为9.47，氨基酸序列与其它物种已知的KAO 序列具有 53.14% ~ 98.61%的相似性，且具有细胞色素 P450 家族蛋白典型的功能结构域和跨膜结构域，将该基因命名为 PcKAO1 ，GenBank 登录号为 KC153027.1 。用同样的方法克隆了对照梨品种‘早酥’（乔化）和‘锦香’（半矮化）的PcKAO1 基因， 通过比对分析发现 3 个品种的 PcKAO1 基因间仅有个别碱基差异，其编码的蛋白序列完全一致。RT-PCR 半定量分析表明：PcKAO1 基因在‘中矮 1 号’各个检测的器官组织中均有表达，其中以种子和子房中的 表达量最高；在 3 个品种的新梢叶片中，除新梢生长初期（5 月 10 日）之外，其他时期矮化砧木‘中矮 1 号’均低于乔化和半矮化的对照品种‘早酥’和‘锦香’，而在这些时期‘中矮 1 号’新梢生长逐渐减 缓乃至停长。 关键词：梨；贝壳杉烯酸氧化酶基因（KAO ）；基因表达；矮化 中图分类号：S 661.2 文献标志码：A 文章编号：0513-353X （2013 ）05-0849-10 Cloning and Expression Analysis of ent-Kaurenoic Acid Oxidase Gene （PcKAO1 ）in Pear * OU Chun-qing，JIANG Shu-ling ，WANG Fei ，WANG Zhi-gang ，MA Li ，and LI Lian-wen （Research Institute of Pomology ，Chinese Academy of Agricultural Sciences，Key Laboratory of Horticultural Crops Germplasm Resourses Utilization，Ministry of Agriculture ，Xingcheng ，Liaoning 125100，China ） Abstract ：Ent-kaurenoic acid oxidase （KAO ）is a critical enzyme in the pathway of gibberellins biosynthesis. In this research ，specific primers were designed based on sequence information of apple genome and a coding sequence of ent-kaurenoic acid oxidase gene was isolated from new shoot leaves of pear dwarfing inter