人参皂苷Rg1与CpG DNA佐剂对细胞免疫功能的影响.pdfVIP

华东区第十七次中兽医科研协作与学术研讨会论文汇编 DNA佐剂对细胞免疫功能的影响 人参皂苷Rgl与CpG 许小琴1李jt-Jtl韦旭斌妒 (1、橱州太学2、古彝大学) 用机理，采用鸡外周血淋巴细胞的体外诱导实验，通过细胞形态学观察、M兀测定法、流式细胞仪测定法和抗病毒 性细胞病变抑制实验等，分别观察Rg．-CpG联合免疫佐剂对鸡外周血淋巴细胞的转化、增殖、活性及诱生干扰素效 12．5pg／mL的添加量．能使PHA诱导的淋巴细胞转化率由74．3％ 价的影响。结果显示：联合免疫佐荆按Rgl25峙+CpG 联合免疫佐剂具有明显促进鸡外周血淋巴细胞免疫功能的作用。 关键词：人参皂苷R91；CpGDNA；免疫佐剂：细胞免疫 人参皂苷Rgl与菌体CpG DNA联合作为重组质粒pcDNA-VP2基因疫苗的免疫佐剂，经动物免 疫实验证实，既能提高基因疫苗免疫的血清抗体效价，又能提高免疫鸡抗超强毒攻击的保护率(另文 报道)。现有的研究表明：人参皂苷R舶主要是促进血清中自蛋白、r．球蛋白、脾脏中蛋白质的合成， 又通过促进巨噬细胞的吞噬能力、增加抗原提呈，以提高抗原刺激机体产生抗体的效率”捌；cpoDNA 是一种含胞嘧啶、鸟嘌呤二核苷酸(cpG)的DNA片段，主要是通过与细胞表面的一种核苷酸非特异 性受体结合，直接激活B淋巴细胞、巨噬细胞和树突状细胞，诱导他们分泌儿．6、IL-12和TNF-d、 IFN-r等细胞因子，从而激活整个免疫系统oⅣ】。为了探索二者联合应用提高重组质粒基因疫苗免疫 效果的机理，本文采用鸡外周血淋巴细胞诱导实验，通过细胞形态学观察、MTT测定法、流式细胞 仪测定法和抗病毒性细胞病变抑制实验等，分别观察Rgl、CpG和R91．CpG对鸡外周血淋巴细胞的 转化、增殖、活性以及诱导淋巴细胞产生干扰素效价的影响。 1材料与方法 1．1材料 35日龄SPF自来航鸡、SPF鸡种蛋，均购自中牧实业股分有限公司南京药械厂SPF鸡繁殖场。 水泡性口炎病毒(VSV)由南京农业大学陈溥言教授惠赠；禽源高致病性大肠杆菌(037 株)，由扬州大学畜禽传染病农业部重点开放实验室分离鉴定。 DMEM，RPMI 1640为GibeoBRL公司产品；新生牛血清为杭州四季青公司产品。 鸡r干扰索由本室制备。 海伊华医学科技有限公司产品；淋巴细胞分离液为上海华精生物高科技有限公司产品；MTT为上海 生物工程有限公司产品i 为Sigma公司产品。其它常规试剂均为国产分析纯级产品。 1．2C扣GDNA制各 次后，于使用前煮沸10rain，然后冰浴中冷却30rain，制成2mg／mL溶液备用。 109 华东区第十七次中兽医科研协作与学术研讨会论文汇编 1．3淋巴细胞转化实验 1640 1．3．1形态学观察无菌采取35日龄SPF白来航鸡血液3ml，肝素钠抗凝，加等量的RPMI 用含5％小牛血清的1640生长液配制成5×106／mL个淋巴细胞悬液，装瓶分组，每组重复5瓶。各 组添加的药物及其浓度分别是；第1组为PHA50ug+Rgl ug／mL；第3组为PHA50pg+R91 50ug／mL；第5组为 25Itg+CpGl2．5Itg／mL；第4组为PHA 仅加生长液的空白对照组。分别加入各种免疫佐剂药物后，于3TC、5％C02培养箱中诱导培养， 每天轻轻摇动2次。经72 20C保存备用。将细胞沉淀物推片，瑞氏染色，每片观察200个淋巴细胞，每组重复5次，统计并 计算淋巴细胞转化率。 X106／mL， 1．3．2流式细胞仪检测分离鸡外周血液淋巴细胞，用1640生长液调整细胞数为5