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Overexpression of SsCHLAPXs confers protection against oxidative stress induced by high light in transgenic Arabidopsis thaliana 盐地碱蓬CHLAPXs基因在拟南芥中过表达可以保护由强光引起的氧化应激;研究背景;材料;目的基因转入AT; 构建转基因载体，采用GATEWAY技术（一种大规模克隆技术）在CaMV35S启动子的控制下将拟南芥中的整条sAPX和tAPX脱氧核糖核苷酸整合到AMBIA1300，利用农杆菌侵染法将质粒载体克隆到拟南芥中。; 1g新鲜的叶子放于4℃的2ml溶液中，50 mM l?1的碱性磷酸缓冲液，PH7.8，5 mM l?1的EDTA（乙二胺四乙酸）和2 mM l?1 的AsA。匀浆在4℃下15000转离心15 min。测定上清液中蛋白质含量,过氧化氢酶,抗坏血酸过氧化物酶和超氧化物歧化酶(SOD)的活性。; 将转基因和野生型拟南芥的叶子剪下来至于卤钨灯下(1000 μmol m?2 s?1 ) 照射2h，灯与样品之间加以流动的水来滤除红光来阻止叶子受热。对照组的叶子至于含水的培养皿中在强光90 μmol m?2 s?1 的条件下照射2h。; 拟南芥过氧化脂质蛋白的含量以丙二醛(MDA)含量为参照，根据Gueta-Dahan等人的方法（1997）。将0.1 g的叶子(鲜重)放于1.5毫升0.1%三氯乙酸(TCA)和1.5毫升0.5%硫代巴比妥酸的，沸水煮10分钟后在自来水冷却,然后在1400转下离心15min。MDA浓度计算公式如下: ; 拟南芥的叶子在用DAB（二甲基联苯胺）染色过程中，内源性过氧化物酶会在原位产生过氧化氢。将拟南芥的叶子取下来至于1mg/mL（PH3.8）的DAB溶液中光照8小时，之后，将叶子在96%沸腾的乙醇中浸泡10min并转移到96%的乙醇中保存。过氧化氢产物可以通过染色的颜色（红棕色）直观的看出来。; 根据Lichtenthaler(1987)方法来测定芥拟南芥叶子中叶绿素含量。新鲜的叶子(0.1 g)用去离子水冲洗,然后用80%的丙酮提取。总叶绿素含量通过定量溶血分光光度法测定663nm和645nm处的吸光度来测定，表示为μg /g。 叶绿素荧光的变化用PAM2000叶绿素荧光仪来测定。PSII的最大量子产率计算公式是如下：Fv/ Fm = (Fm - Fo)/Fm 反应植物潜在的最大光合能力。 F0：PSII反应系统处于完全开放时的荧光产量 Fm：最大荧光产量; 提取总RNA ,分离纯化得到mRNA。电泳依据分子量的大小分离，转膜。RNA分子被转移到膜上后须经过烘烤或者紫外交联的方法加以固定。被标记的探针与RNA探针杂交，经过信号显示后表明需检测的基因的表达。; 根据来源于烟草和拟南芥的CHLAPX同源基因序列，利用反转录酶对CHLAPX的3端和5端扩增来获得完整的SsCHLAPX 序列。通过对3端的处理形成两种成熟的RNA，Ss.tAPX 、Ss.sAPX 。完整的Ss.tAPX cDNA 序列包含1561个核苷酸有1284-bp ORF。Ss.tAPX cDNA 和Ss.sAPX cDNA 氮端的378个氨基酸完全相同，而炭端的49个氨基酸不同。;图 1.不同植物的tAPX和sAPX的同源性分析;CHLAPX+GFP;图 .3 Northern blot 分析盐处理对盐地碱蓬根和嫩枝中APX基因转录水平的影响;图 4.Northern blot分析目的基因在转基因株系中的表达水平 ;图 5.不同光强处理对野生型和转基因拟南芥MDA含量的影响;图 6.不同光强处理对野生型和转基因型拟南芥PSⅡ最大光能转化率的影响;表 1.不同光强处理下野生型和转基因拟南芥叶片中叶绿素a和叶绿素b的含量;图 7.不同光强处理下野生型拟南芥和四种转基因拟南芥株系SOD、CAT、APX活性的变化;图 8.不同光强处理下野生型拟南芥和转基因拟南芥叶片中过氧化氢的分布与含量; 以上数据表明，盐地碱蓬APX基因在转基因拟南芥中过表达可以通过上调抗氧化物酶活性来增强其对强光环境引起氧化胁迫的耐性。??拟南芥Ss.sAPX和Ss.tAPX的过表达可以减少氧化损伤。