扬州大学《植物细胞工程》第五章生殖细胞培养（一）.pptVIP

第五章 生殖器官培养 培养对象 花药培养、花粉培养 子房培养、胚珠培养、胚培养、胚乳培养 离体受精 第一节 花药和花粉培养 一、 概述 概念 花药培养:把发育到一定阶段的花药接种在人工培养基上,使其发育和分化成为植株的过程. 花粉培养(小孢子培养):从花药中分离出花粉粒,使之成为分散的或游离状态,通过培养使花粉粒脱分化,进而发育成完整植株的过程. （二）花药或花粉培养在作物育种中的作用： （5）利于获得优良植株 （6）应用于远缘杂交，克服不育性 （三）花药和花粉培养中雄核发育的途径 1、A途径 小孢子第一次有丝分裂为不均等分裂，形成营养细胞和生殖细胞 （1）A-V途径 由营养细胞重复分裂形成单倍体 （2）A-G途径 由生殖细胞重复分裂形成单倍体 （3）A-VG途径（E途径） 由营养细胞和生殖细胞各自独立分裂，共同形成单倍体 （4）C途径 营养细胞和生殖细胞通过核融合，形成多倍体植株 2、B途径 小孢子第一次有丝分裂为均等分裂，形成大小相近的两个细胞。然后由这两细胞连续分裂形成单倍体植株，或者核融合形成多倍体植株。 （四）花药培养与花粉培养的异同点 培养目的相同，均获得小孢子植株。 花药培养属于器官培养；而花粉培养属于细胞培养。 花粉培养没有药壁组织干扰，单倍体产量高。 二、 花药培养技术 选择花药时，一般通过镜检来确定其中的花粉是否处于适宜的发育期。 最常用的方法有醋酸洋红法。但是，某些植物的花粉细胞核不易着色，需采用焙花青-铬矾法，这种方法能将花粉细胞核染成蓝黑色。 温度 柑橘在20°C以下，完全不能形成胚状体，且愈伤组织形成亦很少，当将温度提高 到21～25°C时便会有胚状体形成，而当温度提高到26°C以上时又完全不能形成胚状体。 油菜若将接种后的花药在30°C条件下培养2～3天，可显著提高花粉胚的形成率， 小麦在33°C条件下培养3～5天，可提高成愈率和绿苗率 光照：先弱后强 三、花粉培养技术 1、取材时期：四分体时期到单核早期。 2、花粉的分离： 3、小孢子纯化： 对获得的小孢子混合物进行分级过筛、梯度离心处理纯化小孢子 4、花粉的培养 1）自然散落法(漂浮培养自然释放法) ： 将花药接种在预处理液或液体培养基上，待花粉自动散落后，收集培养。 2）机械游离法 a.磁搅拌法：用磁力搅拌器低速搅拌培养液中的花药，使花粉游离出来； b.挤压法：在烧杯或研钵中挤压花药，将花粉挤出后收集培养。 花粉培养方法 1、平板培养：花粉置琼脂固化培养基上培养。 2、液体培养： 花粉悬浮在液体培养基中培养，需震荡，以利通气。 3、双层培养：先铺一层琼脂固体培养基（加入失活花药的浸提液），凝固后，在表面加入少量液体培养基培养。 4、看护培养：利用花药或花药愈伤组织释放出的活性物质促进花粉小孢子发育。 5、微室培养：利用小的盖玻片和凹穴载玻片形成微室进行花粉培养。  1、胚状体发育途径：小孢子经历胚发生的各个阶段，最后子叶展开，形成花粉植株。  1、胚状体发育途径：小孢子经历胚发生的各个阶段，最后子叶展开，形成花粉植株。 2、愈伤组织发育途径：小孢子分裂数次形成愈伤，再分化形成花粉植株。此途径产生的植株会出现变异且倍性复杂。 五、花药和花粉培养中的白花苗 白化苗的控制 花粉发育时期：花药培养中，白花苗的比例随接种时花粉发育时期的延迟而提高。 培养基成分：高浓度的2,4-D会使花粉愈伤组织分化出更多的白化苗 培养温度：当培养温度提高时，白花苗的数目也随之增加。 六、单倍体植株鉴定和染色体加倍 单倍体植株的鉴定 1）形态学鉴定 2）染色体分析 单倍体植株的二倍化 看护培养图解 四、花粉植株的形态发生方式 烟草花药培养——通过胚状体途径再生形成小植株 四、花粉植株的形态发生方式 愈伤组织转接种到再生培养基 愈伤组织分化形成再生植株 部分花药产生愈伤组织 接种在平板上的水稻花药 水稻花药培养的愈伤化发生途径 * 花药培养和花粉培养是获 是植物单倍体的有效方法之一 二倍体(diploid )植物其单倍体（haploid）即一倍体（monoploid ）如， 玉米 2n = 2x = 20 n= x = 10； 水稻 2n = 2x = 24 n= x = 12 四倍体(tetraploid)植物其haploid为dihaploid 如，马铃薯 2n = 4x = 48， n = 2x = 24 六倍体(hexaploid)植物其haploid为triploid 如，普通小麦2n = 6x = 42， n = 3x = 21 八倍体(octoploid)植物其haploid为tetraploid 如，草