台湾砷暴露地区青少年尿中无机砷代谢型态与代谢相关基因单核苷酸多.docVIP

臺灣砷暴露地區青少年尿中無機砷代謝型態與代謝相關基因 單核苷酸多型性之研究 Study of Urinary Inorganic Arsenic Metabolism Pattern and Single Nucleotide Polymorphism of Metabolism Related Genes among Adolescent Residents from Arsenic Exposure Area in Taiwan 研究生：劉品妤 Liu, Pin-Yu 指導教授：許岩得 Hsuuw, Yen-Der 【摘要】 砷（Arsenic; As）為一種致癌物質，廣佈於地表與有機體內，主要是以水做為傳輸方式。，砷可分為有機砷與無機砷（inorganic arsenic, iAs），其中無機砷包含三價砷（arsenite, AsIII）與五價砷（arsenate, AsV）。無機砷毒性較有機砷高出約100倍。前人研究指出砷在體內經肝臟甲基化後，其代謝物可經腎臟排出體外，故尿液中砷的含量可做為砷暴露量之生物偵測指標。尿液中可測得之砷物種包含AsIII、AsV、單甲基砷酸（monomethylarsonic acid, MMA）與雙甲基砷酸（dimethylarsonic acid, DMA）及砷trimethylarsine oxide, TMAO）。其中MMA與DMA為尿液中主要之代謝產物。當砷代謝能力下降時易導致體內砷累積量相對增加，進而提高對砷導致相關疾病之感受性。本試驗目的為檢測無機砷代謝途徑中相關基因之單核苷酸多型性（single nucleotide polymorphism, SNP）與砷各代謝產物之濃度，以瞭解砷代謝基因與環境效應間之關係。樣品之收集主要來自臺灣省宜蘭縣壯圍鄉，飲用水樣品取自住戶之飲用水取水口，尿液樣品則以24小時連續收集。檢測砷在體內之代謝指標。尿中砷物種先以高效液相層析儀（high performance liquid chromatography, HPLC）分離後，再以氫化物原子吸收光譜法（hydride generation-atomic absorption spectrometer, HG-AAS）測定各項砷物種濃度；飲用水樣品則以HG-AAS直接分析砷濃度。砷在體內的第一階段代謝能力指標以無機砷佔總測定砷之百分比｛〔iAs/（AsIII+AsV+MMA+DMA）×100%〕｝表示；第二階段代謝能力指標則以MMA/DMA表示之。為分析砷代謝相關基因之SNP與兩階段代謝能力之關係。以生物資訊系統選定砷代謝相關基因〔AS3MT（rs1046778）、GSTO1（rs4925）、GSTO2（rs156697）、MTHFR（rs1801133）與MTRR（rs1532268）〕及非砷代謝相關基因〔TP53（r、SOD2（rs1799725）、MPO（rs7208693）與NOS3（rs1799983）〕所需之引子與限制酶，由尿中萃取之DNA後經PCR擴增片段後以型性（restriction fragment length polymorphism, RFLP進行基因型分析。結果顯示，飲用水中之砷濃度為0至670 ppb，平均值為101.45 ± 27.65；尿中之砷濃度為8.69至953.19 ppb，平均值為105.37 ± 30.96水中砷濃度與尿中砷濃度具顯著相關（P 0.05）。分析五種砷代謝相關基因發現，AS3MT與MTRR基因於第二階段代謝能力均呈顯著差異（P 0.05），顯示AS3MT與MTRR基因對砷在體內之第二階段代謝能力扮演重要角色。進一步分析上述兩基因後得知AS3MT之CC、CT基因型與MTRR之基因型均與砷第二階段代謝能力低下有關（P 0.05），且兩基因間並無交效應（P 0.05）。在四種非代謝相關基因中發現，NOS3基因於砷之第二階段代謝能力較低（P 0.05）唯受限於樣品數，無法分析基因型間是否具有顯著差異。另一方面，分析結果顯示體內砷兩階段代謝能力無法藉由水中砷濃度來預測（P 0.05）。同時兩階段代謝能力在性別間並無顯著差異（P 0.05）。綜合上述結果，砷在體內代謝途徑中其AS3MT與MTRR之基因效應對砷之代謝能力大於環境效應，且AS3MT與MTRR兩者間效應。無機砷、代謝、單核苷酸多型性Arsenic (As) is an ubiquitous element in the crust of the earth and mainly transported in the environment by water. It is a carcinogen for humans. In anima