抗HTNV中及性鼠-人嵌合抗体基因向植物转化探究.docVIP

抗HTNV中及性鼠/人嵌合抗体基因向植物转化探究 　　摘 要：在由农杆菌介导的叶盘法转化烟草的研究中，将含有重组质粒的农杆菌过夜培养后按1∶100接种于新鲜的LB培养液中培养6h至OD600≈0.6时，取菌液经梯度稀释后分别对大小约0.5cm2的烟草叶片进行不同时间浸染。结果表明，用经20倍稀释后的菌液浸染的烟草叶片其转化率达97%以上，且不同时间浸染的处理间无显著差异，培养基中激素浓度以6-BA 1.5mg/L IAA 0.5mg/L为宜 关键词：汉滩病毒；嵌合抗体；转基因植物；烟草 中图分类号 R392 文献标识码 A 文章编号 1007-7731（2016）23-0046-05 Transformation of Full-length Gene of Mouse/human Chimeric Antibody against HTNV into Plants Xie Weiqiang （Yangling Institute of Quality and Technology Inspection，Yangling 712100，China） Abstract：In this thesis Agrobacterium-mediated transformation of tobacco leaf discs with Agrobacterium tumefaciens containing mouse/human chimeric antibody gene against Hantaan virus was studied.Overnight cultured Agrobacterium tumefaciens containing recombinant plasmid was inoculated in fresh LB culture medium by the Ratio of 1∶100 and incubated till OD600 was about 0.6.Then the pellet of Agrobacterium tumefaciens was diluted gradiently and used to immerse the tobacco leaf discs about 0.5cm2 for different length of time.The results showed that the highest transformation efficiency was obtained with the tobacco leaves immersed by the Agrobacterium tumefaciens which had been diluted 20 times，that no less than 97% leaf discs callused.There were no significant differences among treatments for different immersing time.In addition，it was appropriate for callusing of tobacco leaf discs when the concentrations of 6-BA being 1.5mg / L and IAA being 0.5mg / L. Key words：Hantaan virus；Chimeric antibody；Transgenic plant；Tobacco 1 引言 1.1 ?I综合征出血热（HFRS）的研究意义及其进展 肾综合征出血热（HFRS）是一类以发热、出血和肾脏损害为主要临床特征的疾病。全世界90%以上的HFRS病例发生在我国，疫情非常严重，年发病人数超过10万，且以青壮年居多，死亡率约5%～10%。HFRS已成为目前我国死亡人数最多的急性病毒性传染病之一。汉滩病毒（HTNV）隶属于布尼亚病毒科汉滩病毒属，在我国发生的HFRS主要由该病毒引起，因此对HTNV的研究具有十分重要的意义 对HFRS的治疗，迄今还没有特异有效的治疗药物，临床上主要是采取血液透析等方法进行对症处理，费用昂贵。目前，对该病治疗制剂研究最多的是抗HTNV鼠源性单克隆抗体（mAb），但由于其在人体内应用易导致人抗鼠抗体的产生，不仅影响其治疗效果，而且还存在一定的安全性问题。而人源性mAb由于存在制备困难，产量低的问题，也难以广泛应用。基因工程抗体主要是在原核及真核系统中表达，原核表达系统虽然表达产量高，但由于其加工修饰功能限制，会影响表达产物的生物学特性；而真核表达又存在表达