膜片钳放大器的原理说明-马普科学仪器有限公司.PDFVIP

膜片钳放大器的原理说明 AXON 700B 放大器极其相关配件是美国 AXON 公司制造，该 仪器是膜片钳电生理实验的核 心必备设备，将细胞或组织内极其微 弱的电生理信号进行放大处理 ，变为可视化信号。该设备并实现信 息的采集、统计及相应的处理 。应用于生理学、细胞学、神经学等 多个领域，帮助人们对各种生理机制进行深入细致的研究，如细胞 或神经信号的传导、细胞的分 泌及细胞内蛋白的合成运输过程等。 该仪器由计算机控制，电压及 电流变化范围广，具有各种快慢电容 的自动补偿功能，并有灵活多样的信号编辑功能。是目前世界上一 流的电生理膜片钳放大器产品。 放大器的发明及应用领域 1976 年 Neher 和 Sakmann 建立了膜片钳技术，这是一种以记录 通过细胞离子通道的离子电流 来反映细胞膜上单一的或多数的离子 通道分子活动的技术。这种技 术点燃了细胞和分子水平的生理学研 究的革命之火，并使 Neher 和 Sakmann 获得 1991 年度的 诺贝尔医学 与生理学奖。在欧美等国家，膜片钳已经成为一种标准的电生理仪 器，应用从生理、病理、药理 到神经科学的广泛领域内，得到各大 学、医学院等生命科学研究机构的广泛应用。 膜片钳的技术原理 膜片钳系统包括两大部分，硬件和软件部分。其中硬件部分包 括探头、放大器主机、数字化接口，而软件部分则包括 Windows 版 本的 Pclamp10 软件。 膜片钳技术是利用微玻管电极接触细胞，以千兆欧姆以上的阻 抗使之封接，使与电极尖开口 处相接的细胞膜的小区域与其周围在 电学上分隔，在此基础上固定 电位，对此膜片上的离子通道的离子 电流进行检测记录。 用场效应管运算放大器构成 I-V 转换器是这个测量回路的核心 部分。在常效应管运算放大器 的正负输入端子为等电位，向正输入 端子施加指令电位时，由于短 路负端子以及膜片都可等电位地达到 钳制的目的。当膜片微电极尖端与膜片之间形成 10G 以上的封接时， 期间的分流电流达到最小，横跨膜片的电流可 100%作为来自膜片电 极的记录电流而被测量出来。 细胞膜是细胞的重要部分，体现细胞 的绝大部分功能。在细胞膜上分布着众多的通道蛋白，这些通道蛋 白的开通和关闭以及概率分布反映着细胞的生物学性状。因此，研 究这些通道蛋白的离子电流特性极其关键。 测量离子电流时，可简单地按 欧姆定律考虑：用一根灌注了导 电溶液和插入了银丝的玻璃微电极,在微操纵器的调整下,该微电极 接触细胞表面，施加一定的电压，测 量通过细胞表面的电流。 但考虑到细胞级别的单通道电流为pA级别(10-12 A)，属于极其 微弱的电信号，对干扰极其敏 感。因此，测量的主要技术难点在于 极微弱信号获取，带宽补偿， 快慢电容，串联电阻补偿等方面。其 等效电路图如下： 功能特点及参数 用单一电极实现电压钳位和微弱电流检测 实质上是一个 I-V 转换器 （ I-V Converter) 电阻反馈与电容反馈探头 电阻反馈探头的的电流_电压转换率（测量增益） 全细胞记录（Whole Cell Recording )： Rf=0.5G, Vout=IpRf=0.5mV/pA 单通道记录 （S ingle Channel Recording)： Rf=0.5G, Vout=IpRf=0.5mV/pA 从上面公式看，当反馈电阻 Rf=0.5G 时，测量增益(放 大倍数) 为 0.5mV/pA，如果 我们记录的电流很小时，我们要求的反馈电阻 Rf 不仅仅是 0.5G，而 是越大越好，这就要求厂家的生产工艺很高，不 是每个厂家都能达到要求！ 电压钳位： Vp=Vref 膜片钳放大器的组成 一、探头 (Headstage) 探头装配在一个小的封闭壳体中，探头可以方便地安装在微操