美国巨日花粉对大鼠酒精性肝损伤防治的研究.docVIP

美国巨日花粉对大鼠酒精性肝损伤防治的研究 王大仟 廖 磊 彭文君 孙丽萍 中国农业科学院蜜蜂研究所 北京市卫生局临床药学研究所 摘 要：观察美国巨日花粉及其提取物对酒精性肝损伤的防治效果，利用持续酒精灌胃的方法建立了大鼠酒精性肝损伤模型，测定了血清中 A S T 、A L T 、G S H - S T 、G S H 、T G 、M D A 水平，并通过光镜观察了肝脏的病理变化。结果显示，酒精性肝损伤可致血清 G S H - S T 不断消耗使其浓度下降，T G 水平不断增高，除了花粉提取物 C组外，其他各组均能非常显著地提高血清 G S H - S T 水平；提取物 B 、C 、D 组能显著降低血清 T G 水平；提取物B、C 组显著提高血清 GSH 水平。各提取物组肝脏脂肪变性和坏死等病理改变明显减轻，尤以 C 、D 、E 组为佳。实验结果表明，巨日花粉及其提取物对酒精性肝损伤具有保护作用，提取物 C 、D 、E 组分对酒精性肝损伤的保护作用优于花粉。 关键词：酒精性肝损伤；美国巨日花粉；花粉提取物 美国巨日花粉含有丰富的营养物质和多种生理活性物质，被誉为“微型营养库”，具有较强的生理活性，是一种值得研究开发的理想高级天然营养品。巨日花粉可对抗大鼠肝损伤，使肝组织损伤明显减轻；对乙醇所致大鼠肝脏乙醇脱氢酶活性下降有明显保护作用，可明显减轻乙醇所致肝细胞脂肪浸润。动物试验证明，切除2/3 肝脏的小鼠，喂食花粉之后，与不喂食巨日花粉的小鼠相比，体重恢复明显。喂食巨日花粉能明显减少因酒精中毒而死的小鼠数量并减轻肝脏肿大；能预防由于过量饮酒所致的酒精性肝硬化，能帮助受损的肝脏恢复功能。巨日花粉对CCl4造成的肝细胞坏死有明显的保护作用。巨日花粉能对抗酒精中毒引起的肝脏脂质过氧化损伤[5]，巨日花粉提取物对酒精性肝损伤的影响未见报道。本实验通过持续酒精灌胃的方法建立大鼠酒精性肝损伤模型，观察巨日花粉及其提取物对酒精性肝损伤的防治效果。 1 材料与方法 1.1 材料与试剂 42°牛栏山二锅头 牛栏山酒厂；巨日花粉 中国农科院蜜蜂所；巨日花粉提取物 中国农科院蜜蜂所蜜蜂产品研究室。 丙氨酸氨基转移酶(ALT)试剂盒、天冬氨酸转氨酶(AST)试剂盒、甘油三酯(TG)试剂盒 中生北控生物科技股份有限公司；微量丙二醛( M D A )测试盒、谷胱甘肽-S 转移酶(GSH-ST)测试盒、还原性谷胱甘肽(GSH)试剂盒 南京建成生物工程研究所。 1.2 仪器与设备 CENTRIFUGE TDL-5 高速离心机 上海安亭科学仪器厂；UV-2450岛津紫外分光光度计 日本岛津公司；lisa300全自动生化仪 法国STAGO公司。 1.3 方法 1.3.1 实验动物与分组 雌性 Wistar 大鼠80 只，体重180～200g，北京维通利华实验动物技术有限公司提供。随机分为：酒精组10 只：每天早晨灌胃白酒，摄入量为8ml/kg bw，连续30d。除空白对照组外，其余动物每天灌胃白酒，大鼠自由饮食；花粉及其提取物组各 10 只：除每天早晨 灌胃白酒(方法同酒精组)外，每天下午灌胃美国巨日花粉或提取物10g/kg bw(提取物均折合为10g花粉/kg bw)；正常对照组 10 只：每日灌胃等体积无菌饮用水，大鼠自由饮食。各组大鼠连续酒精灌胃及处理 4w 后，于末次处理后24h 全部处死，采血制备血清，放置于－20℃冰箱内备检。另取肝脏用于病理学检测。 1.3.2 观察方法 1.3.2.1 生物指标测定 采用速率法，以全自动生化分析仪测定小鼠血浆ALT(丙氨酸氨基转移酶)、AST(天冬氨酸转氨酶)活性，具体操作按说明书步骤进行。以比色法测定血清 M D A(丙二醛)、GSH-ST(谷胱甘肽 -S 转移酶)、GSH(还原性谷胱甘肽)和TG(甘油三酯)在血浆中的含量。 1.3.2.2 肝脏病理学检查 取肝右叶相同部位组织 10% 福尔马林固定，石蜡包埋，H E 染色。 1.3.3 统计学处理 数据以均值±标准差(x±s)表示，相关原始数据用SPSS统计软件处理，进行方差齐性检验，t 检验和相关分析。 2 结果与分析 2.1 大鼠酒精性肝损伤模型的建立 采用每天定量灌胃酒精、常规饮食的方法，4w 后光镜显示肝脏轻度脂肪变性及小叶中央多发性灶状坏死、炎细胞浸润等酒精性肝损伤早期形态学改变，同时血清 TG 水平与正常对照组比较增高约 47%，差异极显著(p ＜0.01)，血清 GSH-ST水平与正常对照组比较降低了 79%，差异极显著(p ＜0.01)；而血清AST、ALT、GSH、MDA 水平在两组间差异无显著性(p ＞0.05)，但血清 A S T 明显升高；证明模型复制基本成功。 2.2 各组大鼠血清指标比较 2.2.1 ALT