常规病理组织处理-培训课件.ppt

对比： 病理常规组织处理 组织标本离体后，要经过固定、脱水、透明、浸蜡和包埋等一系列的后续处理。组织处理的每一个步骤都非常重要。 因为标本的取材，部位的选择等等，都或多或少地会影响到组织处理的程序、染色的效果以及最终的诊断是否合适 组织结构的保存、有效成分的保留，取决于组织处理所使用的试剂和各步骤处理的时间等因素。为病理诊断提供优质的切片需要技术人员在日常的工作中不断积累熟练的技巧和经验。 一.固定 病理标本的制作和组织处理都必须先进行固定。如果固定不佳，制片的其它程序将非常困难，可以说没有很好的固定就没有很好的HE染色，就会造成诊断困难，甚至误诊，这足以证明固定的重要性 概念：组织离体后，采用某些办法使其细胞内物质尽可能接近其生活状态时的形态结构和位置的过程。（应用各种方法使病理标本尽量保持其离体前状态的过程） 目的：防止组织细胞自溶和腐败，保持细胞内成分（蛋白质、脂肪、碳水化合物或酶类）与原有的结构与生活时相仿。 方法： 1.物理学方法：如低温冷冻，干冰 （dryice，即固态无水碳酸）冰冻真空脱水，石蜡渗入法。 2.化学方法：采用各种化学溶液作固定液，使组织细胞进入固定状态。这是国内最常用的方法。 注意： 1.组织离体及时固定（大标本切开固定） 2.组织块大小适宜（1.5×1. 5×0.2厘米为宜） 3.合理选择固定液（免疫组化可以选择多聚甲醛和中性缓冲甲醛；我病理科大标本一般选择中性缓冲甲醛，它可以兼顾常规染色和免疫组化。小标本选用AAF液） 4.固定液的量为组织5倍以上（最少也要没过组织） 5.固定时间得当：大标本（6-12H）小标本（3-6H），时间太短，影响组织固定的效果，对以后一系列的处理都有影响，切片质量难以保证。组织长时间的固定，福尔马林会产生一种酸，影响核的染色。另外，长时间的固定往往会出现福尔马林色素，尤其是造血器官的标本，更应注意。固定时间过长，可降低抗原的活性，影响组化。 微小破碎组织，在包埋操作时易于识别操 作，组织处理前可浸泡在1%伊红液中5-10分钟。伊红的粉红色在组织处理时可以保留，但是在随后的切片染色中可以洗去不影响正常的染色。 常用固定液的介绍和配制 1.10％中性缓冲福尔马林 ： 甲醛100ml，?无水磷酸氢二钠（Na2HPO4）13g磷酸二氢钠（NaH2PO4·H2O）4.0g， 蒸馏水900ml 特点：渗透力强，收缩小，对抗原保存较好，此液固定效果比单纯10％福尔马林要好。 2.AAF液：95％乙醇85ml，甲醛（浓）10ml，冰醋酸5ml。 特点：此液除有固定作用外，兼有脱水作用，因此，固定后可直接入95％乙醇脱水。 其他还有很多固定液，不一一介绍，有些液体混合后使用比单独使用效果更佳，作用互补，真正达到固定的目的。 二.水洗 1.固定后必须水洗（15-30min),流水冲洗最佳，特别是固定时间长的组织。 2.水洗不彻底后果：福尔马林色素沉着、脱片、染色不鲜艳、免疫组化标记中抗原抗体结合力减弱等现象 三.脱水 概念：利用脱水剂将组织内的水分置换出来，以利于有机溶剂的渗入。 浓度与时间：脱水用的乙醇浓度一般从70％~75％开始，然后依次80％→95％→100％，即由低浓度逐步到高浓度。脱水的时间与组织大小、厚薄有很大关系、组织厚大，脱水时间要长些；而小薄的组织脱水时间相对的可以短些。组织脱水时间在低浓度乙醇中可以长些（如70％~80％），而在高浓度乙醇中要短些，这是因为高浓度的乙醇渗透力不强，延长脱水时间无益，相反高浓度乙醇易使组织收缩、变脆，致使以后切片和观察困难。 脱水剂的种类有很多种，如乙醇、丙酮、甲醇、异丙基醇等。 丙酮是透明无色易燃液体，易与水、乙醇和大多数有机溶液相混合。其脱水快，但渗透差，脱水时间长易引起组织扭曲和变形。丙酮用于脱水可以去除组织中的脂肪。另外，坚硬的组织也可以置入甘油乙醇混合液中浸泡处理。 组织脱水不足的补救 组织脱水不足常影响后继的透明与浸蜡, 表现为含蜡组织块发软，制成蜡块后组织块与周边石蜡容易发生脱离，此种蜡块往往难以切出组织薄片或即使强行切出也会出现组织挤压、破碎，影响病理诊断。 图1组织脱水不足所制蜡块, 切片镜下观察, 组织挤压、破碎, 核染色不清 图2 补救处理后, 组织平整、无破碎, 核染色清晰 把蜡块放入60度石蜡溶液中,使组织周围石蜡完全溶解, (1)保持组织块内石蜡成份处于溶融状态。同时,在75度水浴槽内先后放入盛有30 ml丙酮的A、B 两组烧杯(50 ml容积),时间差约为5 min,预热丙酮。(2)待A丙酮完全沸时, 放入组织块, 此时丙酮内逐渐有白色糊状石蜡沉淀出现, 组织块有液泡冒出。(3)当B丙酮完全沸时, 迅速将组织块从A丙酮换入其中, 处理10 mi