羊膜对山羊角膜缘上皮细胞培养影响的研究.pdf

·116· 生理生化 中国畜牧兽医 2012年第39卷第11期 羊膜对山羊角膜缘上皮细胞培养影响的研究 赵清梅1’2。王建礼1，窦忠英2 (1．北方民族大学生物科学与工程学院，宁夏银川750021； 2．西北农林科技大学，国家干细胞工程技术研究中心陕西分中心，陕西杨凌 712loo) 摘要：比较完整羊膜和去上皮羊膜、不同冻存时间的羊膜对山羊角膜缘上皮细胞体外培养的影响，筛选出羊膜最适处理 方法。将山羊角膜缘组织块分别接种于完整羊膜、去上皮羊膜、新鲜去上皮羊膜、冻存30d去上皮羊膜、冻存90d去上皮羊 膜、冻存180d去上皮羊膜上，比较在完整羊膜和去上皮羊膜及不同冻存时间羊膜上角膜缘上皮细胞的生长特性和组织结构。 试验结果显示，在去上皮羊膜上角膜缘组织块贴壁和细胞增殖能力较完整羊膜强，角膜缘上皮细胞在2组羊膜上均能形成多 层结构，但完整羊膜上形成的组织表层角质化较严重；在冻存30d羊膜上角膜缘组织块贴壁和细胞增殖能力较新鲜羊膜、冻 存90d羊膜、冻存180d羊膜强，角膜缘上皮细胞在各组羊膜上均形成多层结构，其结构无明显差异。结果表明，冻存30d去 上皮羊膜是构建组织工程人工角膜最适的羊膜载体材料。 关键词：羊膜；角膜缘上皮细胞；体外培养 中图分类号：S813．1+1 文献标识码：A 文章编号：167l一7236(2012)11一0116一05 羊膜是人体最厚的基底膜，位于胎盘膜的内层， 1材料与方法 半透明，有韧性，无血管和神经。羊膜因其抗原性 1．1 材料 低，移植后几乎不发生免疫排斥反应(Akle等，1．1．1 试验动物 2月龄～2岁龄关中奶山羊，由 1981)；能分泌生长因子，促进上皮化(Grueterich 杨陵某屠宰场提供。 等，2002)；可抑制炎症和新生血管的形成(solomon1．1．2 主要试剂 表皮生长因子(EGF)、胰岛素 等，2001)；抑制成纤维化，减少瘢痕形成(Tseng等， 1999)；来源广泛，获取容易，容易保存等特点，被广 泛用于治疗各种眼表疾病及作为载体材料构建组织 制药股份公司，青霉素、链霉素均购于哈药集团制药 工程人工角膜(杨瑞青等，2011；荣瑜等，20n；潘志 总厂，胎牛血清(FBS)购于杭州四季青，苏木精、伊 强等，2000)。羊膜因其优良特性在眼科方面得到广红均购于北京市化学试剂厂，多聚甲醛购于西安化 泛应用，但用不同处理方式处理的羊膜对羊膜生物 学试剂厂。‘ 活性的发挥产生重要影响(徐梅等，2008；赵敏等，1．2 方法 2008)，羊膜的合适处理方式将为工程角膜的构建提1．2．1 羊膜的制备与保存 取健康孕妇剖腹产胎 供良好的载体材料。本试验通过比较去上皮和完整 盘，钝性分离胎膜，先用含青霉素、链霉素(含量均为 羊膜及不同冷冻保存时间的去上皮细胞羊膜培养角 100 IU／mL)的生理盐水冲洗3次，去除绒毛膜，再 膜缘组织块，研究羊膜上皮细胞和不同冷冻保存时 用磷酸盐缓冲液冲洗3次，将其剪成5cm大小的方 间的羊膜对角膜缘上皮细胞体外培养的影响，探索 羊膜最适处理方法，为组织工程化人工角膜的构建 提供最适的羊膜载体材料。 一80℃冰箱保存备用。 收稿日期：2012一06—11 d 1．2．2去上皮羊膜支架的制备将冷冻保存60 作者简介：赵清梅(1979一)，女，四川人，博士，讲师，研究方向： 哺乳动物培养工程