高效液相色谱讲座Ⅱ高效液相色谱的基本参数与基础理论(上).pdfVIP

讲 座 高效液相色谱讲座 高效液相色谱的基本参数和基础理论 上（） 张玉奎 李秀珍 卢佩章 （中国科学院大连化学物理研究所） 色谱分离是基于样品组分在两个非互溶 式中tR 保留时间 分（）， 流动相 相间的多次反复平衡分配，利用分配中的微 流速 毫（升／分）。某一组分的保留体积就 小差异而达到分离的目的。两个非互溶相分 是该组分从柱中流出所需流动相体积，一般 别称为流动相和固定相。为了描述分配过程 情况下常以毫升为单位。对细内径柱和毛细 和评价色谱柱性能，从而找出最佳分离条 管柱，由于所需流动相流量很小，F的单位 件，需要有一系列的色谱参数。 用微升／分，此时VR可采用微升为单位。 2-1保留值 不保留物质流出时间以t表示，如图 保留值是用来描述样品组分在色谱柱中 2-1所示。而tF即为不保留物质死体积， 保留程度的参数并作为色谱定性的指标。其 简称死体积。死体积不仅与柱结构有关，而 表示方法有保留时间、保留体积、调整保留时 且与进样系统、检测系统的体积有关。只有 间和调整保留体积。 当柱外体积忽略不计时，tF才表示柱内流 1．保留时间和保留体积 动相所占的体积，以V 表示。任何色谱过 一般认为当进样量很小时，样品从柱中 程的基本保留方程式为： 流出呈高斯曲线分布。从进样开始到峰极大 VR＝Vm＋KV (2-2) 值所需时间称为保留时间，以tR表示，如图 其中K 平衡分配系数，V 固定相体积， 2-1所示 V 流动相所占体积 （当柱外体积不容忽 略时，V 表示柱内空隙及柱外体积之总和）。 由式2（-2可知，溶质的色谱保留行为 主要是由该溶质在固定相和流动相中的平衡 分配系数K所决定的，而K是溶质在两相间 达到平衡分配性质的度量，其定义为溶质在 两相间达到瞬间平衡时在固定相和流动相中 之浓度比，即 由于流出时间与流动相流速成反比，因 此又可用保留体积作为保留值参数，以VR表 示： 其中n,n分别为得质在固足相和流鞫动相嘀中 的量。 不易找到一个在固定相上完全不保留的惰性 2．调整保理时间和调整保留体积 物质，另一方面由于空间排斥作用，一些较 扣除不保留时间和不保留体积的保留值 大分子不能进入固定相微孔中，因而在t0前 定义为调整保留时间 t（R）和调整保留体积 流出，不易判断。下面介绍几种常用的方法。 (VR)，如式 2（-4）和 2（-5）所示： ?1）采用比流动相溶剂分子少一个 tR＝tR-t (2-4) -CH2基团的同系物测定法，例如当用已 VR＝VR Vm 2（-5) 烷作冲洗剂时，测定戊烷的保留时间作为 保留值是色谱过程热力学的重要参数， t0值； 当色谱操作条件一定时，不同物质有其特定