2016新课标三维人教生物选修3 专题1 1.2 基因工程的基本操作程序.docVIP

1．2基因工程的基本操作程序 一、基因工程的基本操作程序 目的基因的获取→基因表达载体的构建→将目的基因导入受体细胞→目的基因的检测与鉴定。 二、目的基因的获取 1．从基因文库中获取 (1)基因文库的含义：将含有某种生物不同基因的许多DNA片段，导入受体菌的群体中储存，各个受体菌分别含有这种生物的不同的基因。 (2)基因文库的种类： ①基因组文库：包含一种生物的所有基因。 ②部分基因文库：包含一种生物的一部分基因。 2．利用PCR技术扩增 (1)原理：DNA双链复制。 (2)过程： 3．人工合成 (1)条件：基因比较小，核苷酸序列又已知。 (2)方法：通过DNA合成仪用化学方法直接人工合成。 三、基因表达载体的构建 1．构建基因表达载体的目的 (1)使目的基因在受体细胞中稳定存在，并且可以遗传给下一代。 (2)使目的基因能够表达和发挥作用。 2．基因表达载体的组成[填图] 四、将目的基因导入受体细胞 1．导入植物细胞 (1)农杆菌转化法： ①原理：农杆菌Ti质粒上的T-DNA可整合到受体细胞的染色体DNA上。 ②适用范围：主要适用于双子叶植物和裸子植物。 (2)基因枪法：常用于单子叶植物。 (3)花粉管通道法：目的基因借助花粉管通道进入受体细胞。 2．导入动物细胞 (1)常用方法：显微注射技术。 (2)受体细胞：受精卵。 3．导入微生物细胞 (1)方法：感受态细胞法，即用Ca2＋处理细胞，使细胞处于一种能吸收周围环境中DNA分子的生理状态(这种细胞称为感受态细胞)。 (2)常用原核生物作为受体细胞的原因：繁殖快、多为单细胞、遗传物质相对较少等。 五、目的基因的检测与鉴定 1．分子水平的检测[连线] 2．个体水平的鉴定 (1)抗虫或抗病的接种实验。 (2)对基因工程产品与天然产品的功能进行活性比较。 1．基因工程主要操作步骤的顺序是(　　) ①基因表达载体的构建 ②将目的基因导入受体细胞 ③目的基因的检测与鉴定 ④目的基因的获取 A．③②④①　　　　　　 B．②④①③ C．④①②③ D．③④①② 解析：选C　基因工程的主要操作步骤顺序是：目的基因的获取→基因表达载体的构建→将目的基因导入受体细胞→目的基因的检测和鉴定。 2．基因工程的核心是(　　) A．目的基因的获取 B．基因表达载体的构建 C．将目的基因导入受体细胞 D．目的基因的检测与鉴定 解析：选B　基因表达载体的构建是基因工程的核心步骤。 3．下列哪项不是基因表达载体的组成部分(　　) A．启动子 B．终止密码子 C．标记基因 D．目的基因 解析：选B　基因表达载体的组成为：目的基因＋启动子＋终止子＋标记基因。终止子位于基因的尾端，是一段有特殊结构的DNA短片段，可使转录在所需要的地方停止下来；终止密码子是mRNA上3个相邻的碱基，使翻译过程在相应的地方停止。 4．目前将目的基因导入动物细胞最常用、最有效的方法是(　　) A．显微注射法 B．农杆菌转化法 C．基因枪法 D．花粉管通道法 解析：选A　显微注射法是迄今为止转基因动物中采用最多、最有效的一种，将目的基因导入动物细胞的方法。 5．在基因工程技术中，可能需要用到CaCl2处理的环节是(　　) A．目的基因的提取和导入 B．目的基因与载体结合 C．将目的基因导入受体细胞 D．目的基因的检测与鉴定 解析：选C　将目的基因导入原核生物受体细胞时，首先用Ca2＋处理细胞，使细胞处于一种能吸收周围环境中DNA分子的生理状态，然后在一定条件下促进感受态细胞吸收DNA分子，完成转化。 1．获取目的基因方法的比较 方法 基因文库的构建 PCR技术扩增 人工合成 基因组文库 库(如cDNA文库) 优 点操作简单 专一性强 可在短时间内大量扩增目的基因 专一性强，可产生自然界中不存在的新基因 缺点 工作量大、盲目性大、专一性差 操作过程较麻烦，技术要求过高 需要严格控制温度、技术要求高 适用范围小 2．RCR反应的过程 3．PCR技术与生物体内DNA复制的比较 比较项目 DNA复制 PCR技术 区别 解旋方式 解旋酶催化 DNA在高温作用下变性解旋 场所 细胞内(主要在细胞核内) 细胞外(在PCR扩增仪内) 酶 DNA解旋酶、普通的DNA聚合酶等 耐热的DNA聚合酶(Taq聚合酶) 温度条件 细胞内温和条件 需控制温度，在较高温度下进行 合成的对象 DNA分子 DNA片段或基因 联系 ①模板：均需要脱氧核苷酸链作为模　板进行物质合成②原料：均为四种脱氧核苷酸 ③酶：均需要DNA聚合酶进行催化 ④引物：均需要引物，使DNA聚合酶　从引物的3′端开始连接脱氧核苷酸 4．(1)用同一种限制酶切割目的基因和质粒，使其产生相同末端。 (2)将切下的目的基因片段与切开的质粒混合，再加入适