反相高效液相色谱法测定野菊花中蒙花苷的含量论文.docVIP

　　反相高效液相色谱法测定野菊花中蒙花苷的含量论文 王伯涛 王锋 张同波 王惠民 【摘要】 目的建立野菊花中蒙花苷的含量测定方法。方法采用反相高效液相色谱（RP-HPLC）法，在室温下，C18色谱柱（4.6 mm×250 mm，5 μm）；甲醇-水-冰醋酸（52∶46∶2）为流动相；检测波长334 nm。结果蒙花苷的线性范围0.05～2.5μg，r = 0.999 9（n=10）；平均回收率99.2%，RSD＝2.4%（n＝6）。结论 该法可作为野菊花药材的质量评价方法。 【关键词】 野菊花； 蒙花苷； 含量测定； 高效液相色谱法 Abstract：ObjectiveTo establish a method for the determination of the content of linarin in Flos Chrysanthemi Indici by RPHPLC．MethodsThe chromatographic condition included a C18 column （250 mm×4.6 mm，5μm）and the mobile phase consisting of methanol-onitored at 334nm．ResultsThe calibration curve ethod can be used for the quality control of Flos Chrysanthemi Indici． Key i Indici； linarin； Content determination； RPHPLC 野菊花为菊科植物野菊Chrysanthemum indicum L. 的干燥头状花序.freeladzu高效液相色谱仪，LC10AD泵，SPD -10A检测器，美国Ana Star 色谱工作站。Hanbon-7 C18色谱柱（4.6 mm×250 mm，5 μm）：江苏汉邦科技有限公司；DiamonsilTM C18色谱柱（4.6 mm×250 mm，5 μm）。VARIAN CARY 50 Probe紫外分光光度计，Cary ETTLER AG 135、AB 204－N电子天平。YB－Z真空恒温干燥箱：天津药典标准仪器厂。 流动相用甲醇、乙腈为色谱纯，水为注射用水。试药均为分析纯。试液按《中国药典》2000年版Ⅰ部附录方法配制，一般溶液按常规方法制备。 野菊花对照药材（0995200002）、蒙花苷对照品（1528-200101）：中国药品生物制品检定所。 野菊花药材为全国各地药检所提供的商品药材样品及中国药品生物制品检定所标本馆馆藏标本。 2 方法与结果 2.1 实验条件的选择 2.1.1 回流提取时间取本品粗粉1 g，置500 ml烧瓶中，加甲醇200 ml，加塞，称定重量。水浴加热回流30 min（从沸腾起开始记时，下同），立即于冷水中冷却，密塞，称定重量，用甲醇补足减失的重量。摇匀，密塞，放置5 min。吸取上清液5.0 ml于大小适宜的容器中，作为样1，密塞备用。原溶液密塞，称定重量。再于水浴加热回流30 min，如法操作，循环5次，分别获得样2 ～样5，密塞备用。 上述实验重复4次。得：样11 ～ 样15、……、样41～ 样4～5，共20份试样。各试样微孔滤膜(0.45 μm)过滤，弃去初滤液，收集续滤液照“2.9样品测定”项下方法测定蒙花苷峰的峰面积。 各实验以第5份试样（最后一次取样）的峰面积为100%，分别计算第1至第4份试样的峰面积百分数。见表1。 取4次实验均值，以时间为横坐标，峰面积百分数为纵坐标作曲线图。见图1。 表1 回流提取时间与提取率（略） 图1 回流提取时间与提取率曲线（略） 图2 流动相中蒙花苷UV吸收光谱（略） 由图1，表1可知，样品回流提取至第5次、回流提取时间总计达到2.5 h时，蒙花苷的浓度基本不再增加，即可认为提取完全。为确保充分提取，供试品溶液的回流提取时间拟定为3 h。 2.1.2 色谱条件 2.1.2.1 检测波长取上述蒙花苷对照品溶液，加流动相稀释至适宜的浓度。以流动相为空白，在400～250 nm范围内扫描吸收光谱。见图2。 由图2可知，蒙花苷在流动相中最大吸收波长为334 nm。所以测定时检测波长选择334 nm。 2.1.2.2 流动相实验了以下几种流动相系统：①乙腈水冰醋酸（40∶59∶1）、（20∶79∶1）、（25∶73∶2）；②甲醇水醋酸（45∶54.5∶0.5）［6］；③甲醇水冰醋酸（45∶54.5∶0.5）、（45∶54∶1）、（45∶53∶2），（52∶46∶2）。 其中以乙腈水冰醋酸