多发性骨髓瘤、急性白血病患者骨髓基质细胞的生长、免疫表型及白介素6的水平论文.docVIP

　　多发性骨髓瘤、急性白血病患者骨髓基质细胞的生长、免疫表型及白介素6的水平论文 .freell）显著高于AL组患者（859.3±203.1 pg/ml）和正常人组（850.9±129.5 pg/ml）。结论：MM、AL患者和正常人BMSC的生长速度、细胞周期中S+G2%和IL-6水平存在显著差异，所检测的抗原表达无差异。 【关键词】 多发性骨髓瘤；急性白血病；骨髓基质细胞；免疫表型；白介素6 Gromunophenotype and Interleukin-6 Level of Bone Marroal Cells in Patients a and Acute Leukemia Abstract The aim of this study munophenotype and interleukin-6 (IL-6) level of bone marroal cells (BMSC) in patients ia (AL) and multiple myeloma (MM). BMSC ethod and the gromunophenotype and cell cycle of BMSC etry. The level of interleukin 6 (IL-6) in BMSC culture system ary （17.3±7.8 days）and continuous （10.3±3.5 days）groal controls (25.8±6.3 and 17.5±2.4 days) respectively. Similarly，S+G2%（17.4±3.6%）of BMSC in patients al controls（8.9±2.3%）. All of the three groups sho in MM patients （1288.5±736.7 pg/ml）l）and normal controls（850.9±129.5 pg/ml）. It is concluded that the groal control are significantly different，ilar. Key ultiple myeloma; acute leukemia; bone marroal cell；immunophenotype； interleukin-6 血液系统恶性肿瘤的生物学行为，例如溶骨或发生髓外浸润都与黏附分子的表达变化以及和基质细胞的相互作用有关。本研究探讨多发性骨髓瘤（MM），急性白血病（AL）及正常骨髓基质细胞（BMSC）在生长速度、免疫表型及IL-6分泌等方面的差异，旨在揭示BMSC在血液系统恶性肿瘤发病机制所起的可能作用。 材料和方法 标本采集 抽取19例MM 患者、12 例AL 初治患者 及6名正常人骨髓15-20 ml，肝素抗凝，加Ficoll液，400× g梯度离心30分钟。分离单个核细胞（MNC）。 BMSC培养 参照文献加以改良，培养体系中含有MEM培养液，20％胎牛血清，青霉素100 U/ml，链霉素100 mg/ml，2 mmol/L 谷氨酰胺。骨髓单个核细胞以1×106/ml浓度种于25 ml培养瓶中，每例2瓶，每瓶5 ml。置于37°C、饱和湿度、5% CO2条件下培养24小时后弃上清及非贴壁细胞，每周换液1次，直至贴壁细胞铺满瓶底。每例取2瓶铺满瓶底时间的平均值。 BMSC传代 以0.25％胰酶-EDTA数滴覆盖细胞层，于37°C培养箱中消化3-5分钟，转移至离心管中，加PBS后300×g离心10分钟。一部分按1×104/ml浓度重新种于25 ml培养瓶中，计算需要再次传代的时间。另外留取至少1×105个基质细胞进行细胞周期测定。 BMSC免疫表型测定 应用FACSort流式细胞仪（Becton Dickinson）中的CellQuest 软件检测，以细胞群表达某种抗原超过20%计为阳性。单抗中抗CD11a-FITC购自天津协和干细胞公司，抗CD29-FITC和抗CD54-FITC 购自Santa Cruz公司，抗CD49d-PE购自Ebioscience公司，抗CD138-FITC购自Serotec公司，其他抗体均购自Becton Dickinson公司，包括抗CD44-PE，抗CD56-PE，抗CD106-PE，抗CD34-FITC，抗CD38-PE。 BMSC细胞周期测定 2×105个BMSC以70％乙醇固定24小时后，300 ×g离心5分钟后弃上清。加入PBS 5 ml离心洗2次。弃上清后加入RNase A（终浓度为60 μg/ml），摇匀，37℃温育30分钟，加入荧光染料溴化乙锭 (PI，终浓度为50 μg/ml)，4℃