大黄素抑制HL60-ADR耐药细胞增殖和诱导凋亡的作用论文.docVIP

　　大黄素抑制HL60/ADR耐药细胞增殖和诱导凋亡的作用论文 陈英玉， 郑合勇， 胡建达， 郑志宏， 郑静， 连晓岚， 吕联煌 【摘要】 本研究探讨中药大黄素（emodin）对人白血病耐药细胞株HL60/ADR的增殖、凋亡影响及其相应的可能作用机制。采用MTT法绘制细胞生长曲线；集落培养法观察大黄素对HL60/ADR克隆形成的影响；细胞周期分析、线粒体跨膜电位检测、Caspase3酶活性检测、Annexin V FITC/PI法、TdT酶介导的原位缺口末端标记法(TUNEL)分析凋亡细胞；RTPCR及yc、Caspase3前体蛋白表达水平的变化。结果表明， 大黄素对HL60/ADR细胞增殖具有明显的抑制作用.freelol/L。细胞周期分析显示，与对照组比较，40、80 μmol/L浓度组细胞被阻滞于G0/G1期比率明显增高（p 0.01），G2/M期细胞比率降低（p 0.01），而20 μmol/L浓度组细胞周期改变差异不具有显著性（p 0.05），各浓度组均检测到典型的亚二倍体峰（凋亡峰）。大黄素作用12小时HL60/ADR细胞线粒体跨膜电位降低，Annexin V FITC/PI法检测到早期凋亡细胞，作用24小时caspase3酶活性显著升高，作用48小时TUNEL法检测到晚期凋亡细胞，细胞凋亡率呈药物浓度依赖性。大黄素作用HL60/ADR细胞不同时间段，bcl2、 cmyc mRNA 和Bcl2、cMyc、Caspase3前体蛋白表达水平均有不同程度下调，并呈时间依赖性。结论 ：大黄素能够有效抑制HL60/ADR细胞增殖，并诱导其凋亡， bcl2、cmyc表达水平下调，线粒体跨膜电位水平降低和caspase3激活可能参与了该过程。 【关键词】 细胞增殖 Inhibitory Effects of Emodin on Drugresistant HL60/ADR Cell Proliferation and Its Induction of Apoptosis Abstract The study ed to investigate the effects of emodin on the proliferation and apoptosis of adriamycinresistant HL60/ADR cells, and to explore the underlying mechanism. The cell viability and colony formation ation assay respectively. Apoptotic cells eans of cell cycle analysis, mitochondrial transmembrane potential levels, caspase3 activity detection, Annexin V FITC/PI staining and TUNEL labeling. RTPCR yc mRNA expressions. The protein expressions of Bcl2，cMyc and caspase3 precursor ined by yc,caspase3 precursor protein edependent manner after treatment odin at different times. It is concluded that emodin efficiently inhibits groay be related itochondrial transmembrane potential and expressions of bcl2 and cmyc, as odin; HL60/ADR cell; proliferation; apoptosis J Exp Hematol 2007; 15(5):955-960 大黄素（emodin），化学名称为6－甲基－1,3,.freelol/L的母液浓度，-20℃保存。 细胞生长的MTT法测定 HL60/ADR细胞的初浓度为2.0×105/ml，接种于96孔培养板（Costar）。实验组分别含10、20、40 μmol/L大黄素，对照组含与最高浓度组等量的DMSO。每组重复3个平行孔，每孔100 μl。用药24、48、72、96和120小时后，每孔加入5 mg/ml MTT(Sigma公司产品)10 μl，继续培养4小时后，小心地吸去上清，每孔加入100 μl DMSO，在酶标仪（STAT FAX2100型）上充分震荡混匀，进行双波长492 nm和630