大鼠心脏中神经肽Y的Y1 受体样免疫反应物质的定位论文.docVIP

　　大鼠心脏中神经肽Y的Y1 受体样免疫反应物质的定位论文 .freelmunoreactivity（-LI）in rat hearts.METHODS Y1 -R immunoreactive（-Ir）cells ined munohistochemistry.RESULTS Y 1 -R-LI e cardiomyocytes of rat hearts embrane of the heart and the inner membrane of interventricular septum.Y1 -R-LI ainly distributed over the plasmalemma of the cell and T tube，and small vesicles.On the other hand，there etimes close to myocardial cells or blood vessels.High level of Y 1 -R-LI alemma and the cytoplasm of neurons，especially in their processes.CONCLUSION The plicated effects of NPY on the heart may be related to the extensive distribution of Y1 recep-tor in varied cells of the heart. 0 引言 含神经肽Y（NPY）的神经纤维分布于整个心脏［1］ .通常情况下，NPY与去甲肾上腺素（NA）共存于交感神经元，但大鼠心脏中约有半数的NPY神经纤维不与NA共存，而存在于心内神经元中［2］ .根据药理学实验研究，NPY对心脏的作用至少通过两种以上的受体介导，即Y1 ，Y2 和Y3 等受体［3］ .通过受体放射自显影方法观察到心脏有Y1 受体的结合点［4］ ，用分子原位杂交方法也观察到人类心脏中有表达Y1 受体的mRNA［5］ .但由于已往的检测方法对组织定位的精确性不够，无法在细胞水平精确地确定受体的位置.本研究用针对Y1 受体C末端肽片段的一种纯化的抗血清［6，7］ ，用免疫组织化学方法研究大鼠心肌细胞和心内神经元Y1 受体的分布. 1 材料和方法 1.1 免疫光镜组织化学方法 SD大鼠（体质量200～250g）10只（本校实验动物中心提供），戊巴比妥钠（50mg kg-1 ，ip）麻醉，经心脏灌注37℃生理盐水50mL和含40g L-1 多聚甲醛的0.1mol L -1 磷酸缓冲液（PB）50mL，再灌注4℃同样固定液250mL，取心脏，放入4℃同样固定液后固定1.5h，200g L-1 蔗糖浸泡24h以上，用冰冻切片机（Leica，德国）切20μm的心脏矢状和冠状切片.根据免疫组织化学方法，将切片放入针对Y 1 受体C末端肽片段的一种纯化的兔抗血清（1∶8000）［6-8］ 中，用生物素标记的羊抗兔血清（1∶200）和Vector ABC盒（Vector实验室，美国）孵育，用葡萄糖氧化酶、二甲基联苯胺（DAB）和硫酸镍胺加强法显色，标记物质呈深蓝色，经干燥、透明和DPX封片.在Nikon Microphot-FX显微镜下观察标本，Leica图像处理系统（Leica-Q570C，德国）取像，出照片. 1.2 免疫电镜组织化学方法 SD大鼠4只，麻醉、灌注和后固定同上，固定液为含50mL L -1 戊二醛和40g L -1 多聚甲醛的PB.取心脏，切50～100μm振动切片.免疫组织化学方法处理同上，进行常规DAB反应，标记物质呈棕色.在10g L-1 锇酸中处理30min，经梯度乙醇和环氧丙烷脱水后，在Epon812中浸润，做平板包埋，聚合后在光镜下定位，取材，在LKBⅢ超薄切片机上切片，不做铅铀染色，在JEOL-1200电子显微镜下观察，拍照，出照片. 用制备抗体用的合成的Y1 受体C末端多肽片段以1μmol L-1 与Y1 受体抗体预吸收24h（4℃）后，做以上免疫组织化学反应，以此检验抗血清免疫标记的特异性. 2 结果 2.1 心肌细胞 大鼠心脏内一些心肌细胞可见中等强度的蓝黑色着色，为Y1 受体-LI（Fig1），可见清晰的Y1 受体-Ir标记条纹，为心肌细胞内横小管结构，有的与心脏内Y 受体-LI血管相邻（Fig2）.左右心房、左右心室、房间隔、室间隔和房室瓣膜上均有Y1 标记-Ir心肌细胞，此类细胞在心脏呈散在的不均匀分布，近心外膜侧分布较多（Fig3），尤以左心室最明显，室间隔近心内膜的两侧分布也较多.在电镜下可以观察到一些心肌细胞的外膜上有精细和间断的Y1