大鼠牙囊细胞培养方法的探讨论文.docVIP

　　大鼠牙囊细胞培养方法的探讨论文 【摘要】 【目的】 探讨大鼠牙囊细胞体外培养的方法。【方法】 分离出大鼠牙囊组织，分别采用组织块培养法、细胞消化分散法、及改良组织块法进行牙囊细胞原代及传代培养，倒置相差显微镜下进行细胞形态学观察，透射电镜观察细胞超微结构。【结果】 培养至第3天，倒置相差显微镜观察发现，采用组织块培养法，见少数细胞从组织块爬出；而细胞消化分散法则可获得数量多的牙囊细胞，但与杂质细胞混杂生长；改良组织块法见量多、相对纯的牙囊细胞。电镜下牙囊细胞无桥粒.freelethod of rat dental follicle cells in vitro. 【Methods】 The dental follicle (DF) tissues ary generation and passage culture by methods of explant, dissociation cell and improved explant, respectively. Consequently, the morphology of the cultured first passage DF cells and their ultrastructure icroscope and transmission electronic microscope, respectively. 【Results】 At the third day in vitro, only a fe the explant by any DF cells mixing pure cells adhered proved explant at the same time. Transmission electron microscopy shoic reticulum（RER） and no desmosmoes. At about 10th , 7th and 6th day in vitro, DF cells e ent ratio of eighty, sixty and one hundred percent by proved explant culture respectively. 【Conclusion】 Improved explant culture ethod for rat DF cells. Key ethodology 牙囊对牙齿萌出起重要作用。牙萌出必须是在牙槽骨的吸收、形成牙槽骨的通道后，才能够完成这一生理过程1。Cahill和Marks2，3研究表明，以手术方法去除小鼠牙囊，牙齿则不能萌出；而保留牙囊，用其它物质替代牙胚，结果替代物可以萌出。Larson4在狗前磨牙牙冠形成后萌出前四周去除牙囊，牙齿同样不能萌出，将剥离的牙囊立即放回成釉器表面，牙齿即能重新萌出。这些研究证明牙齿萌出依赖牙囊的存在。牙囊在牙齿萌出过程中，从组织、细胞和分子水平上对牙齿萌出起重要的调控作用5，6。目前关于牙囊细胞的体外培养，国内外报道尚不多7。本研究以SD大鼠为实验对象，采用组织块培养法、细胞消化分散法及改良组织块法培养大鼠牙囊细胞，比较不同方法的优缺点，以寻求培养牙囊细胞的最佳方法，为研究牙囊在牙齿萌出过程中的作用在细胞方面提供依据。 1 材料和方法 1.1 试剂、仪器及动物实验来源 MEM培养基（GIBCO公司，美国），胎牛血清（杭州四季青生物材料有限公司），HEPES（Sigma公司，美国），胰蛋白酶（Advanced Technology Industrial pany），左旋谷氨酰胺（GIBCO公司，美国），青霉素、链霉素（华北制药股份有限公司），丙酮酸钠（Sigma公司，美国），PBS（北京中山生物技术有限公司），细胞培养瓶（Corning,.freelany），SD乳鼠（中山大学动物实验中心）。 1.2 牙囊组织的分离与获取 取5只新生6或7 d的SD乳鼠，引颈法处死后，用75%酒精浸泡2～3 s，外科法取出下颌骨，置入D-Hanks’平衡盐溶液（含300 U/mL青霉素，300 μg/mL链霉素），在解剖显微镜下分离出下颌第1、第2磨牙牙胚。进一步在解剖显微镜下分离牙囊与成釉器，将分离出的牙囊组织立即置入MEM培养基中（含300 U/mL青霉素，300 μg/mL链霉素，pH 7.2）。用眼科剪将组织块切成1~2 mm大小的块。 1.3 牙囊细胞原代培养 1.3.1 组织块培养法 将上述方法获得的组织块离心5 min，弃上清液，加入12%MEM培养基0.5 mL，转入25 cm2培养瓶中，用弯头吸管把组织小块摆布在培养瓶底上。小块相互距离0.5 cm，轻轻翻转培养瓶，使牙囊组织贴附在培养瓶底，置入细胞培养箱中，