大鼠胰腺发育不同阶段肝细胞生长论文.docVIP

　　大鼠胰腺发育不同阶段肝细胞生长论文 程梅 吴玉龙 贺秀香 徐仁华 孙丽红 【摘要】 目的 研究肝细胞生长因子受体编码基因cmet在大鼠胰腺发育不同阶段的表达。方法 采用高密度寡核苷酸芯片对孕12.5 d（E12.5）、孕15.5 d和孕18.5 d、新生、成年胰腺进行基因转录水平分析，并用RTPCR技术验证基因在大鼠胰腺不同发育时期的表达。结果 cmet基因在E15.5、E18.5较成年特异性高表达。经RTPCR验证，cmet基因表达趋势与芯片结果相符；与芯片cmet探针所用引物不同RTPCR，结果却在各发育阶段呈现与芯片不同的表达趋势。结论 提示cmet可能在胰腺发育过程中起到调控作用，参与胚胎胰腺发育中晚期细胞功能完善的信号传导过程。并且cmet在胰腺发育中发挥作用有可能存在不同转录本。 【关键词】 肝细胞生长因子受体编码基因 cmet 胰腺生长发育 高通量寡核苷酸芯片 RTPCR 【Abstract】 Objective To investigate the function of cmet in the different development stages of rat pancreas . Methods Using Gene Chip Expression Set230A to detect the signal value of different development stages of rat pancreas:E12.5，E15.5，E18.5，neet. Results cmet express highly at rat embryonic day 15.5，18.5. The cmet expression trendency of Gene Chipsis consistent er of RTPCR of have another result.Conclusion cmet protooncogene may plays a role in the function maturation stages of rat pancreatic development. There may be different transcriptions of cmet in the progression of rat pancreatic maturation. 【Key et， pancreatic development， gene chips， RTPCR 胰腺发育是一个复杂的过程，胰岛结构的形成和生物学功能发挥是一个重要环节。大鼠胚胎胰腺发育分为三个阶段：①12.5 d胰腺由胰腺上皮和间充质细胞组成；②胚胎15.5 d左右由胰腺上皮细胞分化而来的内分泌细胞开始突破基底膜向间充质迁移并逐渐相互聚集黏附；③胚胎18.5 d左右基本形成了典型的胰岛结构［１］。完整的胰岛结构是胰腺发挥正常生物学功能的基础，了解完整胰岛结构的形成过程及功能完善调控机制对糖尿病发病机制及治疗的研究有着重要的基础理论和应用价值。 目前，尽管对胰腺胚胎发育的研究在形态学上已明确，但分子网络调控机制上却尚不明晰［２］。功能学研究已经证实在胰腺的整个发育过程中信号通路和转录因子起着非常重要的作用，如FGF, Hedgehog, Notch，TGFβ/activin等信号通路以及NF1 (Tcf1 ),HNF1β(Tcf1β), HNF4 (Tcf4 ), Pdx1, NeuroD1,Ngn3, Pax4, Pax6等转录因子［３，４］。胰岛结构形成是一个受细胞黏附及迁移等多因子调控的过程［5，6］。 本文以SD大鼠为模型，选取E15.5 d、E18.5 d及新生这三个大鼠胰腺发育和细胞功能完善的关键时期，通过affymetrix高通量多聚寡核苷酸芯片及RTPCR技术对cmet基因在胰腺发育不同阶段的表达做出初步分析。为揭示cmet基因在胰腺发育细胞功能完善过程中的作用提供了一定依据。 1 材料与方法 1.1 材料 成年SD大鼠60只，雌20只，雄40只，体质量250 g左右，由南京医科大学动物中心提供。Gene Chip Murine Genome RAE230A 芯片(Affymetrix 公司)。mastercycler PCR 仪(Eppendorf公司), Trizol Reagent(美国Gibco公司) , RNAeasy Mini Kit (Qiagen) , RTPCR试剂盒(Tayobo)。 1.2 方法 1.2.1 组织取材：于6:00时，将雌雄以1∶2合笼，次日检测有阴栓者，定为受精0.5 d(E0.5) ，