大鼠角膜缘移植后角膜缘上皮中RANTES和MCP论文.docVIP

　　大鼠角膜缘移植后角膜缘上皮中RANTES和MCP论文 【关键词】 移植物排斥 Changes of RANTES and MCP1 expression in epithelium of corneal limbus after limbal transplantation in rats 【Abstract】 AIM: To investigate dynamic expressions of RANTES and MCP1 in the epithelium of corneal limbus after limbal transplant and their relationship bal transplantation and healthy rats al controls. The expression of RANTES and MCP1 mRNA RNA after transplantation al control group (P 0.05). RANTES reached peak on POD 7 and MCP1 on POD 11 and then descended constantly. The expression of RANTES and MCP1 mRNA RNA may be helpful to the diagnosis of rejections and the prognosis. 【Keybus corneae transplantation; chemokine; gene expression; polymerase chain reaction 【摘要】 目的： 研究RANTES和MCP1在大鼠角膜缘移植模型中的动态表达，探讨其与移植排斥反应发生的关系. 方法： 将大鼠随机分为同种异体移植组（AG组）、自体移植组（SG组），并以健康大鼠作为正常对照组（N组），用定量竞争性RTPCR的方法，在术后（POD）1, 4, 7, 11, 14, 21和30 d分别检测各组大鼠RANTES和MCP1 mRNA的含量，并观察大鼠眼表变化，判断排斥反应的发生. 结果： 术后5 d开始AG组出现排斥反应，8~10 d达到高峰. RANTES和MCP1 mRNA含量术后均大幅增加（P 0.05）.freelRNA含量无差异,POD7～30均有明显差异. 结论： 动态检测RANTES和MCP1 mRNA含量，可能有助于临床上对角膜缘移植排斥的诊断和对预后的估计. 【关键词】 移植物排斥；角膜缘移植；趋化因子；基因表达；聚合酶链反应 0引言 同种异体角膜缘移植术后排斥反应是导致手术失败的主要因素. 调节激活正常Ｔ细胞表达和分泌细胞因子（regulated on activation normal T expressed and secreted,.freelonocyte chemotactic protein1, MCP1）是CC（β）亚族趋化因子成员，能够通过趋化和激活单核巨噬细胞和淋巴细胞，参与调节机体的免疫应答［1］. 我们应用大鼠同种异体角膜缘移植模型，通过定量竞争性RTPCR检测移植术后不同时间角膜缘上皮中RANTES和MCP1 mRNA含量变化，探讨两者与移植排斥反应之间的关系. 1材料和方法 1.1材料选用体质量为200~250 g的雄性MLV逆转录酶、Taq DNA聚合酶购自Promega公司， dNTP购自TaKaRa公司，EcoRⅠ购自Gibco公司，HindⅢ购自华美公司，9个PCR引物由北京赛百盛生物公司合成. 1.2方法 1.2.1分组实验随机分为两组，每组10只大鼠，均为右眼接受手术. ① 同种异体角膜缘移植组(ills等［3］提出的评分方法判断排斥反应的发生，直至术后30 d. 1.2.3取材和总RNA提取① 在术后（POD）1, 3, 7, 11, 14, 21和30 d ,分别刮取各组角膜缘植床上皮，放入EP管中；② TRIzol试剂一步法提取总RNA，测A值定量RNA浓度，加入3倍体积的无水乙醇，-70℃保存. 1.2.4定量竞争性RTPCR按照Bertolotto等［4］的方法进行. ① 引物设计. RANTESS引物： 5′ATCCCTCACCGTCATCCTC3′，A引物： 5′GCTCATCTCCAAATAGTTGATGT3′，T引物： 5′CGTCATCCTCCCTACCT CTCCCTCGCACT3′；MCP1（358 bp），S引物： 5′TAGCATCCACGTGCTG TCTC3′， A引物： 5′TGAGGTGGTTGTGGAAA AGA3′，T（270 bp）引物： 5′GTGCTGTCTCCGG