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（二）常用指示酶及其指示反应 1．脱氢酶 用作工具酶的脱氢酶都是以NAD(P)H为辅酶的脱氢酶，例如LDH、MDH、G6PD、GLDH等，它们催化下列反应： P + NAD(P)H + H+ ? PH2 + NAD(P)+ 可对NAD(P)H在紫外吸收或紫外激发荧光进行测定 应用：ALT、AST、CK等酶活性测定。 2．过氧化物酶 POD可催化过氧化氢与某些色原反应，例如与4-氨基安替比林（4-AAP）和酚反应，将其氧化为有色物质，反应如下： POD 2H2O2 + 4-AAP + 酚 醌亚胺（红色） + 4H2O Trinder反应： 应用：GOD、COD、GPO、甘油氧化酶、尿酸酶（属于氧化酶类）等都可以将各自的底物氧化为过氧化氢，因此都可以与POD偶联，通过Trinder反应加以测定。 四、底物浓度测定 利用酶催化反应的高效率和专一性，可以测 定底物浓度。与酶活性测定类似。 第三节 同工酶测定 同工酶的定义 同工酶产生的机理 同工酶的测定方法 同工酶的定义 是催化功能相同，但是分子组成及理化性质不同 的一组酶，是在同一种属中由不同基因位点或等位 基因编码的多肽链单体、纯聚体或杂多体。 一、同工酶产生的机理 （一）由不同基因位点编码 （二）由等位基因编码 （三）由多肽链化学修饰产生 二、同工酶的测定方法 （一）按照理化性质不同进行分离鉴定 1．电泳法 同工酶氨基酸组成不同，等电点不同，电泳迁移率 也就不同，据此可用电泳法分离鉴定。 2．层析法 根据同工酶分子荷电量不同，可用离子交换层析法 加以分离。 （二）按照底物专一性不同进行鉴定 同工酶底物专一性不同，Km值也不同。如果同工酶之间的Km值差别足够大，可以通过测定其Km值加以鉴定。 （三）按照最适pH不同进行鉴定 同工酶分子氨基酸组成不同，最适pH也不同。如果同工酶最适pH之间的差别足够大，可以通过调节缓冲溶液的pH值加以鉴定。 （四）按照免疫学特性不同进行分离鉴定 （五）按照耐热程度不同进行鉴定 （六）选择性抑制法 第四节 酶学分析在临床诊断上的应用 血浆酶的来源 酶的区域化分布 酶活性测定在临床诊断中的应用 同工酶的诊断价值 一、血浆酶的来源 血浆酶 血浆特异酶 非血浆特异酶 外分泌酶 细胞内酶 二、酶的区域化分布 表7-3 诊断常用血清酶的来源 血清酶 符号 来源 鸟氨酸氨基甲酰转移酶 OCT 肝 卵磷脂胆固醇酰基转移酶 LCAT 肝 谷氨酸脱氢酶 GLDH 肝 山梨醇脱氢酶 SDH 肝 丙氨酸氨基转移酶 ALT 肝、肾、心 异柠檬酸脱氢酶 ICD 肝、胎盘、心 ?-谷氨酰转肽酶 ?-GT 肝、胆、肾、小肠 5ˊ-核苷酸酶 5ˊ-NT 肝、胆道 单胺氧化酶 MAO 肝、肾、脑 天门冬氨酸氨基转移酶 AST 心、肝、骨骼肌 肌酸激酶 CK 骨骼肌、心、脑 乳酸脱氢酶 LDH 心、肾、骨骼肌、肝、肺 碱性磷酸酶 ALP 小肠、胎盘、肝、肾 酸性磷酸酶