尿液中卟啉的导数分光光度测定法-检验医学.PDF

维普资讯 圭 墨兰竺壁墨查 。t第6 s! 尿液中卟啉的导数分光光度测定法 上海市消化疾病研究所(2OOOO1) 李蓉蓉 上海第二医科大学检验系(2O0025) 李立群 内窖摄耍 本3~ Sep—PakCIa处理尿浪 ，用甲醇冼脱卟啉，加盐酸试荆后 ，在记录分 光光度计中进行吸收光谱扫描 ，并梅它转换为二阶导数光谱 ，以峰高距离D4o2进行粪卟啭定量 穗 定。本法攥作简便 ．样品 新鲜果为宜。蛋白质、胆色素、果沉淀和某些药物对测定有干扰，使 结累偏低 。 关■询 粪卧_带Coproporphyrin 二阶导数分光光受铡定法￡econd—derivativespectrophotometry 正常人尿藏中排出的卟啉以粪 卟咻 为 (三)盐酸试剂：1．25mol／L盐酸中含乙 主，尿卟啉及其它卟啉类化台物含量较少．在 二胺四 乙酸二钠(EDTA—Na2)1．0reotol，L· 卟啉代谢障碍对卟啉排出量常增加 ．以往尿 (四 )过氧化氢：3O AR级 液中卟啭类化合物的定量测定往往需要复杂 兰、撮作步囊 的抽提和分离后再用分光光度法或荧光光度 (一 )先用 10ml甲醇通过Sep—PakC18 法测定，Joa鹊与Sweeney“首次用导数分光 小柱 ，再用 10ml纯水通过小柱 光度法进行尿渡中口啉的定量测定，直接将 (= )用 2oral注 射器吸取新 鲜 尿 液 屎液甩盐酸试剂稀释后进行吸收光谱扫描， loml，通过上述 已处理过的小桂 ，流速约为 再用二阶导数光谱进行定性和定 量 测 定。 每分钟4D滴左右 。最后用空气将小拄 内尿液 Ficheux等0发表了类似的报道 ．我们在试 排净 。 用他们的方法时，由于仪器设备的不同，不 (三 )用5ml注射器吸取 甲醇2ml，通过 能重复他们的结果．经用Sep—PakC18将尿 已吸附过尿液的小柱 ，流速 同上，此时甲醇 液处理后可得到较满意的结果。现报道如下。 洗脱出棕黄色液体，最后用空气将小柱 内甲 醇全都排出，收集于 15×100nua试管内． 材 料 和 方 法 (四)甲醇洗脱 液 中加 入 盐 酸 试 剂 一 、 倪署 3m1，摇匀后滴加 Hi 一滴，摇匀 (一)美国 Be~kmaaDU一7型分光光度 (五)将上述反应液倒入 lcm比色杯内， 计，附图象记录器 。 在 BeckmanDU-7分光光度计中以空气为 (二 )Sep--PakCt8小柱 (Waters产 对照，进行扫描，波长范围为370~430nm． 品 j 扫描速率为600nm．／min。荧光屏上显示出吸 = 、试荆 收光谱 。通过调节按键使其转换为二阶导数 (一 )卟啉标准液：称 取 lmgI型 或 光谱，△^取 16rim 为最佳条件 。此时纵坐 Ⅲ型粪卟啭或尿卟啉，或原Ⅱ卜啉暖分别溶解 标的上，下值可用按键根据夼啉浓度的高低 于 lmol／L盐酸 l~Oml中，4℃避光保存 ． 任意调节 ，使峰顶与峰谷间的距离 约为 3～ 卟啉均为 Sigma产 品。 lOcm．