纸电泳法分离单核苷酸幻灯片.pptVIP

纸电泳法分离单核苷酸 实验目的 学习电泳技术的基本原理 了解RNA碱水解的原理 掌握纸电泳分离单核苷酸的原理和方法 什么是电泳？ 带电物质在电场中可以向其所带电荷相反的电极移动的现象称电泳。 电泳分离生物大分子的原理： 由于混合物中各组分所带电荷性质、电荷数量以及分子量的不同，在同一电场的作用下，它们泳动的方向和速度也不同。因此，在一定时间内各组分移动的距离不同，从而达到分离和鉴定的目的。 生物大分子在电场中受到的作用力 在电场中，推动带电质点运动的力（F）等于质点所带净电荷量（Q）与电场强度（E）的乘积。 F＝EQ 质点的前移同样要受到阻力（f ）的影响，对于一个球形质点，服从Stoke定律，即： f＝6π r ην（r为质点半径，η为缓冲液的粘滞系数，ν为质点移动速度） v=EQ /6πrη 影响V的因素 颗粒本身：带电、大小、形状 外界因素：电场强度E、缓冲液pH、离子强度I、电渗、支持介质的筛孔等。 电泳技术的分类 自由电泳（无支持体）：等电聚焦电泳、等速电泳及密度梯度电泳等； 区带电泳（有支持体）：滤纸电泳（常压及高压）、薄层电泳（薄膜及薄板）、凝胶电泳（琼脂、琼脂糖、淀粉胶、聚丙烯酰胺凝胶）等。 实验原理 RNA的水解 RNA在酸、碱和核酸酶的作用下，发生水解，降解成为多核苷酸和单核苷酸等产物。 RNA用酸水解