生化实验指导修订.docVIP

生物化学 实验指导 海洋学院生物化学课程组编 2011年8月10日  目 录 实验室守则 ………………………………………………………………………………… Ⅱ 海洋学院实验记录的基本要求 ………………………………………………………… Ⅲ 实验报告撰写要求 ………………………………………………………………………… Ⅴ 实验一糖的测定实验二 纸层析法分析氨基酸G-250 法测定蛋白质含量 ………………………………… 10 实验六 垂直板聚丙烯酰胺凝胶电泳法 …………………………………………… 13 实验实验八酶活性的测定 实验? 过氧化物酶同工酶 实验十 凝胶层析 ………………………………………………………………………… 33 实验十一 酪蛋白的制备 ………………………………………………………………… 36 实验室守则 一、安全卫生 所有进入实验室的人员都有监督实验室安全、卫生、仪器操作和维护的义务。 在测定完成后，使用者须做好实验室的清洁工作，将公用物品归还原位， 立即将所使用过的试验台、实验用品等清洗干净，清除垃圾，并及时归还所借物品。 实验室安全卫生实行值日生制，值日生在每天使用完实验室后进行检查，必须保持实验室内环境整洁，走道畅通，设备器材摆放整齐。吸烟、吃东西、乱抛纸屑杂物有毒或有腐蚀性气体的实验在通风橱内进行。实验后的废渣、废液，要倒在废渣箱和废液缸中，不准随便倾倒或倒入水池中。实验中，必须如实地记录各种实验数据实验后，实验结果，正确处理实验数据，不得更改原始数据。实验报告撰写要求 实验报告是对实验工作的总结，撰写实验报告主要有两个目的一是通过对实验、科学撰写实验报告，自己实验过程中的问题和漏洞，改进今后实验工作。 供试的条件、数量、取样方法；实验的设计，实验组与控制组情况，自变量因素的实施及条件控制等；实验步骤的具体时间的；讨论是对实验结果的含义和意义评价。者根据的客观事实和结论，结合自己的认识与了解，通过分析思考，讨论和分析与实验结果有关的问题①对实验结果进行理论上的分析和论证②对实验的探讨如对实验误差、出现和常识相违的数据等进行必要的反省，对的可靠程度和适用范围作进一步说明③对实验方法的可靠性和局限性进行探讨，提出可供深入研究的问题以及本实验中尚未解决或需要进一步解决的问题，对未来的建议。实验一 糖的测定 ，香菇多糖具有抗病毒、抗肿瘤、调节免疫功能和刺激干扰素形成等功能本实验学习定量测定方法。 实验原理 的可溶性糖主要是指能溶于水及乙醇的单糖和寡聚糖。 反应式： 该法特点：灵敏度高，测定量少，快速方便。 三、实验仪器及试剂 1．仪器：分光光度计、电炉、铝锅、20mL刻度试管、刻度吸管、记号笔、吸水纸适量。 2．试剂： （1）：称取g蒽酮（AR），。 （）1％标准液：将分析纯在80℃下烘至恒重，精确称取1.000g。加少量水溶解，移入100mL容量瓶中，加入0.5mL浓硫酸，用蒸馏水定容至刻度。 （）100ug/糖标准液：精确吸取1％标准液1mL加入100mL容量瓶中，加水定容。 实验步骤 1．标准曲线的制作：取20mL刻度试管11支，从0－10分别编号，按表－1加入溶液和水，然后向试管内加入mL 蒽酮试剂，摇匀以糖含量为横坐标，光密度为纵坐标，绘制标准曲线，求出标准直线方程。 2．可溶性糖的提取取，擦净表面污物，，称取g，℃热水30ml，在80-90℃恒温水浴锅中提取30分钟，4000 rpm离心10分钟。收集上清液，沉淀重复提取一次，合并两次上清液，用循环水真空泵抽滤除去漂浮物。吸取滤液1.0ml稀释至100 ml，得待测样液。 3．测定吸取mL样品液于试管中（重复2次），向试管内加入mL 蒽酮试剂，摇匀。由标准线性方程求出糖的量，按下式计算测试样品中糖含量。式中：C一标准方程求得糖量（ug）n一稀释倍数V－提取液量（mL）α一吸取样品液体积（mL）W一（g）简述苯酚法与法测定可溶性糖的基本原理。 2干扰可溶性糖测定的主要因素有哪些？怎样避免？实验二 纸层析法分析氨基酸一、实验目的1.掌握纸上层析的一般原理和操作方法。 2.了解氨基酸的特征性颜色反应。 3.学会分析未知样品的氨基酸成分。 纸上层析是一种比较简单的色层层析法，这种方法所依据的原理就是利用不同物质在两种互不相溶的溶剂中溶解度的不同而达到分离的目的。实验是在特制的滤纸上进行。滤纸可视作惰性载体，吸附在滤纸上的水作为固定相，而有机溶剂作流动相。将要分离的混合物点在滤纸的一端，随着展开剂的移动，由于各组分在两相中的分配系数不同，各组分就以不同速度在滤纸上随展开剂移动。展开剂停止移动，各组分就停留在滤纸的不同位置上。若各组分无色，可根据其性质。喷上显色剂，以观察斑点的位置。 用Rf值表示各组分的移动率： a为各组分移动的距离，