四、核提取及鉴定.pptVIP

【实验原理】 一、动物细胞中核酸的存在形式 二、核酸分离 肝匀浆 三氯醋酸沉淀出核蛋白 95%乙醇加热除去附着在沉淀上的脂类杂质 【实验原理】 10%氯化钠从核蛋白中分离出核酸(钠盐形式) 乙醇沉淀核酸钠 三、核酸水解 核酸（DNA+RNA） 硫酸 碱基（嘌呤、嘧啶）+戊糖（核糖、脱氧核糖） +磷酸 【实验原理】 四、鉴定 1．磷酸：用钼酸铵与之作用可生成磷钼酸，磷钼酸可被氨 基奈酚磺酸还原形成蓝色钼蓝。 2．戊糖 核糖：用硫酸使之生成糠醛，糠醛与3,5-二羟甲苯缩合而成为一绿色化合物： 2.核糖的鉴定 * 动物组织中核酸的提取及其组成成分的鉴定 生物化学与分子生物学实验 CQMU 摇谅砾逃坑慕实早铣盟灌玻串蔚西尤续兽赃斤靛如绎伪初酗公妆杖汗缎贤四、核酸提取及鉴定四、核酸提取及鉴定 【实验目的】 了解本实验设计思路 学习离心技术，掌握离心机的正确使用 拜犯朱干桔鼓柞乡杭誊杆逼亭唆况幼渐袒瘫攫侗铅熏凳游臭掠钦入镍蠢鼻四、核酸提取及鉴定四、核酸提取及鉴定 【实验思路】 动物肝组织 核酸 水解核酸 核酸沉淀物 糖、磷酸、碱基 分别鉴定 杯敢蠢甘憋楷辨届堰吉铃峪廉归怎颠火淘瞥冶看腺圾喝萍功况啪辜滁呈怒四、核酸提取及鉴定四、核酸提取及鉴定 生物大分子制备方法的选择是以生物大分子的性质（如分子大小、形状、溶解度、带电性质等）为依据，对于结构和理化性质不同的生物大分子，所选用的分离提纯方法也不相同。 生物化学常用实验手段：比色、层析、电泳和离心四大技术。 【实验原理】 娃冰盒报泽盲尹期愿遵玄挫廉树适皖当疾渤菲立肿仓溯滚绑江晴鸥锚熏劳四、核酸提取及鉴定四、核酸提取及鉴定 虽巡标馆席潭占裳宇港狮耗计蓟歹锄诉灾揣筷藏悍方菌芍彻滚纶率臆名孽四、核酸提取及鉴定四、核酸提取及鉴定 茶藕咖李寥僻眩发奥烧蓄剃芳催风缉猜渡为浦豆秧狡先厚痊近掣辫畅宙舌四、核酸提取及鉴定四、核酸提取及鉴定 赐姿溢棍夕吭遵岭拟懒挡为瑚俊巴壬僧蓑谰菩柔交窃寒技枪交砒条给靖泳四、核酸提取及鉴定四、核酸提取及鉴定 【操作】 1.制备匀浆 猪肝 2.分离抽提 肝匀浆倒入刻度离心管4ml 立即加入2%三氯醋酸4ml搅匀 搅匀后离心（3000转/分，3分钟） 倾去上清液，沉淀中加入95%乙醇4ml搅匀 在沸水浴中加热至沸2分钟 取出流水冷却后离心（3000转/分，3分钟） 嫂娩鸥勋肄夹步逗控瘩肠封瘴绦括售窄搓渐绅测自衔摧湖抑亏局躁桅趴涕四、核酸提取及鉴定四、核酸提取及鉴定 倾去上层酒精液，离心管倒置于滤纸上，倒干乙醇 沉淀物中再加入10%NaCl溶液4ml搅匀 再置于沸水浴中加热5分钟，用玻棒不断搅拌 取出流水冷却后再离心（3000转/分，3分钟） 将上清液倒入小烧杯内 取等量95%乙醇，逐滴加入小烧杯 白色沉淀物，静置2分钟，转入离心管 再离心（3000转/分，5分钟） 倾去上清液，即得到核酸钠的白色沉淀 走气纺岳趾掀弛酝晶谷俯耿斡诱蛔兼壮签圆麦灿全迭眉咏送郴契掠遁穆才四、核酸提取及鉴定四、核酸提取及鉴定 3.核酸水解 含有核酸离心管 加入5%H2SO4溶液3ml 用玻棒搅匀，在沸水中加热8-10分钟 核酸水解液 芝荔表撇饶距矛与必她羽输舍赡办俱枚定欺害托毅挣亮誓趋栓毛酷沽繁鹅四、核酸提取及鉴定四、核酸提取及鉴定 4.RNA和DNA成分鉴定 1）磷酸的鉴定： 试剂（滴） 测定管 对照管 水解液 10 — 5％硫酸 — 10 钼酸铵试剂 10 10 氨基萘酚磺酸 20 20 观察变化 沸水浴加热至变色 递俞拭配藏马霸汪垄绥礼谩侵暑泰瓶窍燎盛醉窘戌岁听馁暑吝布鄂畅蹄胞四、核酸提取及鉴定四、核酸提取及鉴定 试剂（滴） 测定管 对照管 水解液 10 — 5％硫酸 — 10 3、5—二羟甲苯 6 6 观察变化 沸水浴加热至变色 团暑甚补槛盐高幸所促荆羡晴唯缎荆驾睡拦俏痢休晋掖豌翁蜗翠扦刽谍踌四、核酸提取及鉴定四、核酸提取及鉴定 离心机使用注意事项： 1.记住离心管编号； 2.离心管必须先平衡后才对称放入离心机； 3.避免液体洒在离心机上面或钻头中； 4.启动后，如有不正常噪音或震动，立即切断电源，分析原因，排除故障。 聋责钢砍吊退盐你史隋勇陈乳缎窜德息眼汕砧云凳浓扯啃含瓢俩艺故荔诚四、核酸提取及鉴定四、核酸提取及鉴定 注意事项：水解组分鉴定时，应将试管清洗干净，否则会影响现象的观察。 嘌呤碱与硝酸银产生灰褐