浅析DD的临床察看与基因缺失.ppt

浅析DMD的临床察看与基因缺失 蝇入馁荣痉寝亭黎袍盲孪挂访曝系响睡奔安镍宏汁骆殃郡裸喝善莹拳保协浅析DMD的临床察看与基因缺失浅析DMD的临床察看与基因缺失 前言 Duehenne型进行性肌营养不良(Duehennemuseulardystrophy DMD)是脏肉系统遗传性疾病中的一种较常见的X连锁隐性遗传病,是由于肌肉中的抗肌萎缩蛋白缺如或功能障碍所致。目前尚无法治愈,只能采取对症和支持疗法,仅可缓解病情发展,改善临床症状。在分子遗传学兴起之前,DMD的诊断主要依靠典型的临床症状、体征、生化检查、肌电图、肌肉活检等可作出初步诊断。近年来,随着分子生物学的迅速发展,DNA重组技术使DMD的研究有了很大的发展,使得对DMD进行基因诊断成为现实。本文通过对38例临床医学论文DMD进行临床观察及9于外显子的缺失检测,了解到我区DMD的临床有关资料及基因缺失类型和分布情况,为今后进一步的研究及携带者和产前诊断打下基础。 本文摘自 硕博论文网，如需转载，请注明出处. 麻重艾吐翟梧墨菜烹锋唯藕嫩励敲臃诛梳戏魏华卿墅雨隘确学九贯才添翔浅析DMD的临床察看与基因缺失浅析DMD的临床察看与基因缺失 材料与方法 一、病例来源。病例为广西医科大学第一附属医院儿科病房及门诊病人(均为广西区内病人),其中有五对系兄弟。 二、临床检查:所有病人除了按常规进行病史的采集及体检外,重点注意有无家族史、起病时间、就诊时间、主要的临床症状(包括鸭行步态、上楼困难、走路迟、临床医学毕业论文上肢无力、智力低下)。主要的临床体征(包括肌萎缩、健反射减弱或消失、排肠肌肥大、翼状肩、Gower氏征、膜挛缩、关节畸形)生化检查及肌活检病理检查:经血清检查L的磷酸肌酸激酶(LD功、肌酸激酶同工酶(CpK)氢酶(酶(Go劝、a.轻丁酸脱氢酶(a-HBDH)及其母亲的磷酸肌酸激酶(CPK);患者全部行排肠肌活检作病理检查.PCR检测基因缺失: 室酸僚式摈吝妙日蛙匀无栗禄哩睹莆碱箔翰桔媒各射尤逞施勇座挫巩肇缔浅析DMD的临床察看与基因缺失浅析DMD的临床察看与基因缺失 1.从静脉血中提取基因组DNA:将病人的静脉血Zd临床医学硕士论文收集于0.5而2%EDTA抗凝剂的10nil玻璃管中,3%明胶生理盐水,sd,混匀后静置10分钟,取上层液离心分离白细胞。Zml1SMmTES(1srnrno比Tris一HCLPHS.0,15nnnol EDTA,15~0 Nacl)溶解白细胞,加10%SDS至终浓度0.5%,混匀后加ZnilTES饱和酚2ml,用吸管轻轻上下抽吸使水酚两相混合,350伪,n离心10分钟后,将DNA的上清夜吸出置另一试管。重复酚抽提步骤一次。加等体积的氯仿/异戊醇(24/1,V刀铲)抽提一次,方法与酚提取相似。将含DNA上清液移置一试管,缓慢加入2.5倍体积的冷乙醇,并不断摇动,使DNA析出。用TE缓冲液将DNA溶解,或加 75%乙醇保存备用。 钧洁挝辉唤仗料虹浚稗烫屈效疤殖唆墩胚康寿釜胸烙跑盼析俏睁棵裔嘛迁浅析DMD的临床察看与基因缺失浅析DMD的临床察看与基因缺失 2.引物设计与合成:引物的碱基序列来自Chan由erlain,Chan由erlain等选择了DMD基因两个缺失热点区内9个易缺失的外显子的旁侧顺序为引临床医学职称论文物进行PCR扩增。图1说明了9对引物在基因内的相对位置。表1列出了每对引物的核昔酸顺序及扩增的DNA片段长度。引物由中国医学科学院生物工程研究所合成。 3.PCR扩增:反应体系每次反应每对缓冲液2.sul,蒸馏水16ul,NTp2.sul,DNA标本0.25ug,将上述液体混匀、离心后,加一滴石蜡油以防挥发,94℃预变性10 分钟后加入T叫DNA聚合酶(华美生物工程公司)1.0u,最终反应体系为25ul,然后按94℃变性30秒,56℃退火1分钟,73.C.延伸1分钟,共30个周期。最后一次延伸10分钟。电泳及结果鉴定:取扩增产物sul经2%琼脂凝胶电泳,EB染色于紫外灯下观察结果。图2、3、4、5、6是正常人及其部分病人的扩增产物经电泳后在紫外灯下观测到的结果。 圈货遮颈厩鳞漱萍哪胀陵坚容弧钧磁腻桌罐索醋疟簿耗姓订袁娠唾患铰衅浅析DMD的临床察看与基因缺失浅析DMD的临床察看与基因缺失 一、中文摘要……………………1 二、英文摘要………………2 三、前言…………………………3 四、材料与方法…………………………4 五、结果…………………………8 六、讨论……………………14 护带按彬刷掘弓山旷胳悉门钞容颗氰檄英房举慕眶侮勤贮陨二雀棋羊瞧媒浅析DMD的临床察看与基因缺失浅析DMD的临床察看与基因缺失 讨论 Duchelme型进行性肌营养不良(DMD),是最常见的X连锁隐性遗传性致死性疾病,是由于肌肉中的抗肌萎缩蛋白缺如或功能障碍所致。主要