不同海拔高原地区严重烫伤延迟复苏大鼠肺组织细胞凋亡及基因调控机制论文.docVIP

　　不同海拔高原地区严重烫伤延迟复苏大鼠肺组织细胞凋亡及基因调控机制论文 【摘要】 目的：探讨不同海拔的高原地区严重烫伤延迟复苏后肺组织细胞凋亡及其基因调控机制. 方法: 雄性arker选用两个正常的肝脏组织,位于芯片的一角. 1.2.3病理学观察将不同海拔高度实验组、对照组肺组织标本石蜡包埋、切片、HE染色，显微镜下观察照像. 1.2.4免疫组织化学分析采用SP法免疫组织化学染色, 按试剂盒操作说明进行, DAB显色, 苏木素复染. 对照组用PBS液代一抗. 免疫组化定量分析: 每张切片随机选5个高倍视野, 测每个视野阳性信号平均灰度值. 反应免疫组化染色越深, 灰度越小, 即阳性表达越高. 统计学分析: 采用SPSS10.0统计软件,计量资料用x±s表示;组间比较采用方差分析及LSDt检验;双变量相关分析采用Pearson相关分析,α=0.05. 2结果 2.1组织芯片整体观察42个点阵排列整齐, HE染色无掉片、重叠和扭曲现象, 适合免疫组化染色的观察和结果的判定. 2.2不同海拔高度肺组织细胞凋亡的变化与正常对照组比较IFR组与DFR组在各时相点表达均增强, 主要分布在肺泡上皮细胞的胞核. 定量分析示(表1): ①DFR组与IFR组在两个高度各时相点均高于对照组(P 0.05); ②同一海拔高度, DFR组在6, 12, 24 h时相点, 其阳性表达强度均高于相对应的IFR组时相点(P 0.05); ③高海拔DFR组与IFR组的表达强度, 在6, 12, 24 h时相点, 强于低海拔DFR组与IFR组(P 0.05). 2.3不同海拔高度肺组织Bcl2的变化与正常对照组比较, IFR组与DFR组在各时相点表达均增强, 主要分布在肺泡上皮细胞的胞浆. 定量分析示(表2): ①DFR组与IFR组在两个高度各时相点均高于对照组(P 0.05); ②海拔1517 m DFR组与IFR组相比, DFR组在6, 12, 24, 72 h时相点, 其Bcl2表达强度均高于IFR组(P 0.05); 海拔3848 m DFR组与IFR组相比, DFR组6 h阳性表达最明显, IFR组于24 h表达最明显; ③高海拔DFR组与IFR组的表达强度在6, 12, 24, 72 h时相点, 强于低海拔DFR组与IFR组(P 0.05). 2.4不同海拔高度肺组织HIF1α的变化正常对照组比较IFR组与DFR组在各时相点表达均增强, 主要分布在肺泡上皮细胞的胞核或胞浆. 定量分析示(表3): ①DFR组和IFR组在两个高度各时相点均高于对照组(P 0.05); ②同一海拔高度DFR组与IFR组相比, 前者在6, 12, 24, 72 h时相点, 其HIF1α表达强度均高于相对应的IFR组时相点(P 0.05)；③高海拔DFR组与IFR组的表达强度分别与低海拔DFR组与IFR组相比, 在6, 12, 24, 72 h时相点, 高海拔DFR组强于低海拔DFR组(P 0.05).表1两个海拔烫伤后大鼠肺脏组织TUNEL标记细胞凋亡免疫组化灰度值的比较表2两个海拔烫伤后大鼠肺脏组织Bcl2免疫组化灰度值的比较(表3两个海拔烫伤后大鼠肺脏组织HIF1α免疫组化灰度值的比较 2.5相关性分析细胞凋亡与Bcl2间呈正相关(r=0.872, P 0.05)；细胞凋亡与HIF1α间呈正相关(r=0.945, P 0.05). 3讨论 Bcl2是重要的抗细胞凋亡基因, 在严重烫伤延迟复苏后肺损伤中表现得尤为突出, 本实验显示在海拔1517 m, 伤后12 h在DFR组肺泡上皮细胞即出现凋亡细胞, 与此同时, 相应位Bcl2呈高度表达, 表明肺脏组织在严重烧伤延迟复苏后的肺泡上皮细胞可能是通过Bcl2的过度表达来发挥其抗凋亡作用, 减轻细胞损伤. Bcl2抗细胞凋亡的作用机制可能与以下几方面有关: ①抑制Ca2+的释放; ②bc12 通过阻止促进细胞凋亡基因信号传递或阻止这些诱导基因产物发挥作用; ③细胞内抗氧化作用. 也有研究表明, Bcl2抗氧化作用是间接的, 即可能在于抑制超氧阴离子的产生而不是直接清除活性氧, 而bc12的这种抑制超氧阴离子的作用与其能抑制细胞色素C的释放有关. 而在海拔3848 m, 伤后24 h DFR组肺泡上皮细胞和中性粒细胞大量凋亡, 相应位Bcl2的表达却较弱, 表明高海拔地区缺氧及缺血再灌注损伤更易引起肺组织细胞的凋亡, 其机制为: ①缺氧条件下Bcl2家族表达发生变化; ②高海拔地区缺氧可通过降低Bcl2基因的表达来促进大鼠肺组织细胞凋亡的发生, 这与司少艳等采用DNA降解、TUNEL法染色标记和Bcl2mRNA点杂交检测大鼠在慢性缺氧时胸腺细胞的增殖能力, 结果表