禽白血病病毒基因芯片检测方法的建立.PDFVIP

华北农学报 ·2015，30(6)：91．96 鸡传染性贫血病毒、网状 内皮增生症病毒与 禽 白血病病毒基因芯片检测方法的建立 苏 霞，朱瑞豪，陈小玲 ，杨丽聪，周宏专 ，徐福洲，杨 兵 (北京市农林科学院 畜牧兽医研 究所 ，畜禽疫病 防控技术北京市重点实验室 ，北京 100097) 摘要 ：基于多重 PCR技术 ，建立鸡传染性贫血病病毒 (CAV)、禽 网状 内皮增生症病毒 (REV)、禽 白血病病毒禽 (ALV)A、C、D亚群 的基因芯检测方法。根据 NCBI收录的鸡传染性贫血病毒 (CIAV)、禽网状内皮增生症病毒(REV) 与禽 白血病病毒 (ALV)A、C、D亚群参考毒株的序列，设计合成特异性扩增引物及探针 ，将下游 引物进行 Cy3荧光标 记 ，制备基 因芯片；分别提取几种病毒 的基 因组 DNA，进行 PCR扩增后与探针进行杂交，荧光检测仪扫描并分析结果 。 结果表明：制备的芯片能够同时检测 CIAV、REV与 ALVA、C、D亚群 ，该方法对病毒 的最低检测限为 10copies／mL，特 异性试验结果表明，该方法与NDV、MDV和 IBDV均无交叉反应 ，可快速鉴别ALV、REV、CIAV。为今后在临床应用中 快速鉴别诊断 CIAV、REV与 ALVA、C、D亚群提供 了可行性 。 关键词 ：鸡传染性贫血病毒 ；禽 网状 内皮增生症病毒 ；禽 白血病病毒 ；基因芯片 中图分类号 ：$432．4 文献标识码 ：A 文章编号 ：1000—7091(2015)06—0091—06 dol：10．7668／hbnxb．2015．06．014 TheEstablishmentofGeneChipforChickenInfectiousAnemiaVirus， Reticul0e0theli0sisVirusandAvian LeucosisVirus SU Xia，ZHU Rui-hao，CHEN Xiao—ling，YANG Li—cong，ZHOU Hong—zhuan，XU Fu—zhou，YANG Bing (InstituteofAnimalHusbandryandVeterinaryMedicine，BeijingAcademyofAgricultureandForestry Sciences，BeijingKeyLaboratoryforPreventionandControlofInfectiousDiseasesinLivestockand Poultry，Beijing 100097，China) Abstract：TodevelopagenechipassayofrthedetectionofChicken infectiousanemiavirus，Reticuloeotheliosis virus，Avian leucosisviur ssubgroupsA，C andD basedonthespecificgenefragmentamplifiedbymultiplexPCR． ThereferencessequenceofChickeninfectiousanemiavirus，ReticuloeotheliosisvirusandAvianleucosisvirussub- groupsA ，C andD wereobtained from GenBank；whichwereusedtodesign thespecificprimersand probes．The downstream primerswerelabeledwithCy3，andgenechipwassubsequentlyprepared．ThetotalDNA wasextracted from thethreeviurses．TheproductamplifiedbyusingPCR withthelabeledprimerswashybridizedwith thegene chip．Thehybridization signalwasdetectedand analyzed byafluorescence scanner．Theresultss