茄子 ISSR-PCR 反应体系优化及验证.pdfVIP

中国蔬菜 2010 （24 ）：48-52 CHINA VEGETABLES 茄子ISSR-PCR 反应体系优化及验证 1 ，2 1 1 1 1 梁任 王益奎 李文嘉 黎 炎 吴永官 1 2 （广西农业科学院蔬菜研究所，广西南宁 530007 ；广西大学农学院，广西南宁 530004 ） 摘 要：以茄子为试验材料，采用改良 CTAB 法提取茄子嫩叶总 DNA ，结合单因素设计和正交设计 L9 （34 ）的优点 ，探讨 Mg2+ 、dNTP 、引物及 Taq DNA 聚合酶等因素对茄子 ISSR-PCR 反应体系的影 响 ，利用16 份广西茄子主要栽培品种对最优处理组合进行验证。结果表明 ，在25 μL 反应体系中，含 2.5 μL 10×buffer、2.0 ～3.0 mmol·L-1 Mg2+ 、0.32 ～0.36 mmol·L-1 dNTP 、0.4 μmol·L-1 引物、50 ng 模板DNA、 0.6 U Taq DNA 聚合酶等成分，可以获得比较稳定、清晰和丰富的条带。 关键词 ：茄子 ；优化 ；ISSR ；验证 图分类号 ：S641.5 文献标识码 ：A 文章编号 ：1000-6346 （2010 ）24-0048-05 Optimization and Verification of ISSR Reaction System of Eggplant 1, 2 1 1 1 1 LIA NG Ren-fan , WA NG Yi-kui , LI Wen-j ia , LI Yan , WU Yong-guan 1 2 （Institute of Veg etable, Guangxi A cademy of Agricultural Sciences, Nanning 530007, Guangx i, China; Colleg e of Ag ronomy ，Guangxi University, N anning 530004 , Guangxi, China ） Abstract ：In this study, eggplant （Solanum melong ena L. ）was the test material. T he total DNA was extracted from its fresh young leaves by modified CTAB method. The advantage of orthogonal design and single factor design were applied to optimize ISSR-PCR amplification system of eggplant in 4 factors, such as Mg2+ , dNTP, primer and Taq DNA polymerase at 3 levels, and the optimal treatment was verified by 16 cultivate eggplants from Guangxi. T he results indicated that an optimal reaction system （25 μL ）was established. It was consisted of 2.5 μL 10×buffer, 2.0-3.0 mmol·L-1 Mg2+, 0.32-0.36 mmol·L-1 dNTPs , 0.4 μmol·L-1 primer, 50 ng template DNA , 0.6 U Taq DNA polymerase. The sor