实验二尿肌酐.docVIP

实验二 尿肌酐的定量测定 肌酐是肌酸代谢的终产物，人体肌酸的含量约120克，其中90%存在肌肉，而且大部分以磷酸肌酸的形式而存在于肌肉中。磷酸肌酸脱去磷酸后生成肌酐。 肌酐在肌肉中是无用之物，随尿液排出即为尿肌酐。正常人日排出量十分稳定，成年男子日排出量约1—1.8克，女性为0.7—1克，不受食物蛋白质含量和尿量的影响，运动员也有类似情况。 尿肌酐日排出量的绝对值与肌肉发达程度、训练水平、性别和运动项目等有关。因此，测定尿肌酐含量可以间接了解骨骼肌中磷酸肌酸的含量，从而了解运动员肌肉的工作能力、机能水平和质量，评定运动员的训练效果。 实验目的 1、掌握尿肌酐的测定方法和原理。 2、强化试管实验操作技能，掌握分光光度计、离心机的使用。 二、实验原理 无蛋白尿滤液中的肌酐与碱性苦味酸作用，经反应生成红色的复合物苦味酸肌酐，然后与同样处理之标准比色，读出光密度，即可求出尿中肌酐的含量。 三、实验试剂及仪器 （一）、实验试剂 1、饱和苦味酸：称取苦味酸（A.R）15克，置于大烧杯中，加蒸馏水1000ml，冷却后有结晶析出，表示已达饱和，倾出上清夜备用。 此液标准饱和度的测定—准确取清夜10ml，用0.1%酚酞作指示剂，以0.1N的氢氧化钠（NaOH）滴定需5.2—5.4ml应能中和为准。 2、2.5N的氢氧化钠溶液：称取氢氧化钠（NaOH）100克，加蒸馏水使溶解，冷却后用蒸馏水稀释至1升。 3、碱性苦味酸： 准确量称取饱和苦味酸5份，加2.5N的氢氧化钠1份，应用时即配即用为宜。 4、肌酐标准储备液（1mg/ml），准确量称取纯肌酐500mg,用0.1N盐 酸溶解，然后移至500ml的容量瓶中，加0.1N盐酸至刻度。加甲苯数滴防腐，存于冰箱，此溶液稳定，可长期保存。 5、肌酐标准应用液（0.01mg/ml）: 准确量取3ml标准储备液，置于500ml的容量瓶中，加水稀释至刻度，加甲苯或二甲苯数滴（此溶液可保存一周以上）。 （二）、实验仪器 分光光度计、离心机、移液管、离心管及普通试管 四、实验操作步骤 1、无蛋白尿液的制备： 测定管（普通试管） 加入0.5ml尿液 D1 加蒸馏水4.5ml D2 混匀后移取0.3ml于一离心管 D3 加5.4ml0.037N硫酸 D4 加0.3ml10%钨酸钠,静置5-10分钟后的上清液即为无蛋白尿液 D5 2、尿肌酐浓度的测定 取以上无蛋白尿液1ml至刻度试管 D6 加蒸馏水3ml D2 加碱性苦味酸2ml，混匀后放置10分钟 520nm比色，空白调零读取测定管光刻度值（OD测） 计算尿肌酐的百分含量 计算公式： 尿肌酐系数=24小时尿肌酐量（mg）/体重（Kg） OD标值经测定为0.120 注意事项 1、在显色反应10-15分钟内比色，如时间过久，滤液内其他物质与苦味酸起非特异性反应而影响结果。 如测定管显色过深，应稀释尿液后测定其结果乘以稀释倍数。 3 磷酸肌酸 肌酐 H3PO4 　　　　　 　　　　　　　(200　＝肌酐（mg%） 　　　　　　　 测定管光密度 标准管光密度